請問用pbr322質粒轉染後的哺乳細胞後用什麼抗生素篩選

2021-04-17 22:20:34 字數 2953 閱讀 4559

1樓:魚骨頭

pbr322質粒具有兩種抗生素抗性基因氨苄青黴素抗性基因和四環素抗性基因,選一個就可以。

質粒pbr322帶有何種抗性基因 a,卡那黴素抗性基因 b,四環素抗性基因 c,青

2樓:匿名使用者

質粒(pla**id) 質粒是真核

細胞細胞核外或原核生物擬核區外能夠進行自主複製的遺傳單位,包括真核生物的細胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細菌細胞擬核區以外的環狀脫氧核糖核酸(dna)分子.現在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的dna以外的dna分子.在基因工程中質粒常被用做基因的載體(vector).

許多細菌除了擬核中的dna外,還有大量很小的環狀dna分子,這就是質粒(pla**id)(補充:部分質粒為rna).質粒上常有抗生素的抗性基因,例如,四環素抗性基因或卡那黴素抗性基因等.

有些質粒稱為附加體(episome),這類質粒能夠整合進細菌的染色體,也能從整合位置上切離下來成為遊離於染色體外的dna分子. 目前,已發現有質粒的細菌有幾百種,已知的絕大多數的細菌質粒都是閉合環狀dna分子(簡稱cccdna).細菌質粒的相對分子質量一般較小,約為細菌染色體的0.

5%~3%.根據相對分子質量的大小,大致上可以把質粒分成大小兩類:較大一類的相對分子質量是40×106以上,較小一類的相對分子質量是10×106以下(少數質粒的相對分子質量介於兩者之間).

每個細胞中的質粒數主要決定於質粒本身的複製特性.按照複製性質,可以把質粒分為兩類:一類是嚴緊型質粒,當細胞染色體複製一次時,質粒也複製一次,每個細胞內只有1~2個質粒;另一類是鬆弛型質粒,當染色體複製停止後仍然能繼續複製,每一個細胞內一般有20個左右質粒.

這些質粒的複製是在寄主細胞的鬆弛控制之下的,每個細胞中含有10-200份拷貝,如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質的合成還會使質粒拷貝數增至幾千份.如較早的質粒pbr322即屬於鬆弛型質粒,要經過氯黴素處理才能達到更高拷貝數.一般分子量較大的質粒屬嚴緊型.

分子量較小的質粒屬鬆弛型.質粒的複製有時和它們的宿主細胞有關,某些質粒在大腸桿菌內的複製屬嚴緊型,而在變形桿菌內則屬鬆弛型. 在基因工程中,常用人工構建的質粒作為載體.

人工構建的質粒可以集多種有用的特徵於一體,如含多種單一酶切位點、抗生素耐藥性等.常用的人工質粒運載體有pbr322、psc101.pbr322含有抗四環素基因(tcr)和抗氨苄青黴素基因(apr),並含有5種內切酶的單一切點.

如果將dn**段插入ecori切點,不會影響兩個抗生素基因的表達.但是如果將dn**段插入到hind iii、bam h i 或 sal i切點,就會使抗四環素基因失活.這時,含有dna插入片段的pbr322將使宿主細菌抗氨苄青黴素,但對四環素敏感.

沒有dna插入片段的pbr322會使宿主細菌既抗氨苄青黴素又抗四環素,而沒有pbr322質粒的細菌將對氨苄青黴素和四環素都敏感.psc101與pbr322相似,只是沒有抗氨苄青黴素基因和psti切點.質粒運載體的最大插入片段約為10 kb(kb表示為千鹼基對).

e.coli的pbr322質粒在基因工程中有何重要性

3樓:***

質粒載體pbr322是研究得最多,使用最早且應用最廣泛的大腸桿菌質粒載體之一。

質粒載體pbr322的大小為4361bp,相對分子質量較小的是它第一個優點。優點之二是它帶有一個複製起始位點,保證了該質粒只在大腸桿菌的細胞中行使複製的功能。具有兩種抗生素抗性基因——氨苄青黴素抗性基因和四環素抗性基因,可供轉化子的選擇標記是它的第三個優點。

質粒載體pbr322的第四個優點是具有較高的拷貝數,經過氯黴素擴增以後,每個細胞中可累積1000-3000份拷貝,該特性為重組體dna的製備提供了極大的方便。

同時,由於其為人工構建質粒,雖然帶有抗藥性基因,但已不能在自然界的宿主細胞間轉移,同時應用安全菌株,亦不會引起抗生素抗性基因傳播。

缺點:pbr322質粒沒有多克隆位點。

4樓:匿名使用者

為克隆過程中,作為載體使用。

pbr322質粒是一種什麼樣的載體粘粒質粒噬菌體

5樓:匿名使用者

載體種類:質粒、噬菌體、腺病毒載體、逆轉錄病毒載體 質粒特點: 存在於細菌染色體外的小型環狀dna分子。

具有自我複製功能。 帶有抗性基因及表型識別等遺傳性標記物。 經改造後具有多克隆位點。

舉例:pmd-18t質粒、pucl9質粒、pbr322質粒等

在基因工程中,常用人工構建的質粒作為載體.人工構建的質粒可以集多種有用的特徵於一體,如含多種單一酶切位點、抗生素耐藥性等.常用的人工質粒運載體有pbr322、psc101.

pbr322含有抗四環素基因(tcr)和抗氨苄青黴素基因(apr),並含有27種限制性內切酶的單一識別位點.如果將dn**段插入ecori切點,不會影響兩個抗生素基因的表達.但是如果將dn**段插入到hind iii、bam h i 或 sal i切點,就會使抗四環素基因失活.

這時,含有dna插入片段的pbr322將使宿主細菌抗氨苄青黴素,但對四環素敏感.沒有dna插入片段的pbr322會使宿主細菌既抗氨苄青黴素又抗四環素,而沒有pbr322質粒的細菌將對氨苄青黴素和四環素都敏感.psc101與pbr322相似,只是沒有抗氨苄青黴素基因和psti切點.

質粒運載體的最大插入片段約為10 kb(kb表示為千鹼基對). 2023年,科學家將質粒作為基因的載體使用,為基因工程的誕生奠定了基礎.最常用的質粒是大腸桿菌的質粒.

這種質粒常含有抗生素抗性基因,例如,卡那黴素抗性基因

質粒轉染的大腸桿菌為什麼要挑選單克隆?

6樓:

因為我們挑的是菌落,而一般我們認為一個菌落就是又一個細菌繁殖產生的。所以菌落內的細菌都是同一基因型(也就是說要不然都帶有質粒,要不然都沒有或者是其他質粒),也就是說要挑單克隆。

如果挑的不是單克隆,那麼菌落內的細菌的種類就會不同,有的有質粒,有的沒有,有的帶其他質粒。這樣的話,我們做後續的實驗就不好做了。

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