小鼠外周血有哪些血細胞,各有什麼特點

2021-04-19 03:05:27 字數 2151 閱讀 9737

1樓:一生一個乖雨飛

血細胞包括紅細胞、白細胞和血小板組成。

紅細胞無細胞核,呈雙面凹的圓盤狀,是血細胞中專數量最多的一種,屬白細胞無色,體積比紅細胞大,有細胞核,血小板無核,又稱血栓細胞,由於血小板非常小,從光學顯微鏡下觀察血塗片,不易觀察到,所以沒有細胞核的有紅細胞和血小板。

血細胞約佔血液容積的45%,在正常生理情況下,血細胞和血小板有一定的形態結構,並有相對穩定的數量。

2樓:匿名使用者

有 紅細胞

白細胞 血小板

紅細胞中有少量的網積紅細胞,

白細胞包括有顆粒細胞,淋巴細胞和單核內細容胞.

其 中有顆粒細胞包括嗜酸性粒細胞,嗜鹼性粒細胞和中性粒細胞.其中中性粒細胞佔50-70%,淋巴細胞佔20-30%,單核細胞佔3-8%左右.

怎樣分離小鼠外周血中性粒細胞

3樓:風雪中的緣

外周血中單個核細胞和單核細胞,其體積、形態和密度與其他細胞不同。淋巴細胞分離液是一種密度介於1.075∽1.090之間而近似於等滲的溶液。

如何用流式檢測小鼠外周血中t細胞的凋亡

4樓:匿名使用者

中性粒細胞(pmn)是機體防禦系統的主要組成部分,能吞噬和殺滅多種致病原。致病原與血清中的特異性抗體(igg)結合後,通過igg的fc部分與pmn表面的受體——fcγrⅲ(cd16b)相結合,從而被吞噬。fcγrⅲ有a、b兩種型別,fcγrⅲa(cd16a)是一種跨膜糖蛋白,pmn表面的fcγrⅲb(cd16b)是一種糖肌醇磷脂蛋白(gpi-錨蛋白)[1]。

近年發現陣發性睡眠性血紅蛋白尿症(pnh)患者在血細胞表面缺失各種特異的gpi-錨蛋白,cd16b正是這類蛋白之一。為**pmn表面cd16b的缺失與pmn釋放氧自由基殺菌功能的關係,將我們的研究報告如下。

材料和方法

1 標本採集 正常人外周血取自****血庫正常獻血者,正常骨髓取自****胸外科手術患者的肋骨,pnh患者按2023年全國溶血性貧血會議擬定的診斷標準,並經流式細胞儀免疫熒光法檢測cd59標記率進一步確診。

2 中性粒細胞的分離  新鮮的外周血或骨髓,用肝素抗凝,經淋巴細胞分離液分離,去除淋巴細胞和單個核細胞,用右旋糖酐(dextran,分子量=7~11 萬) 沉降和低滲法去除紅細胞,得到純淨的中性粒細胞。用臺盼藍染色法檢查細胞活力,須保證細胞存活率大於95%。

3 間接免疫熒光法檢測cd16 取1×106個細胞,懸浮於100μl 2% bsa中,室溫封閉30分鐘,加 cd16單克隆抗體(immunotech sa公司產品),在室溫作用30分鐘後,用pbs洗滌2次,再懸浮於100μl 2%bsa中,加fitc 標記的羊抗鼠igg(gibco公司產品)室溫暗染20分鐘後洗去二抗。用500μl pbs懸浮細胞,用流式細胞儀檢測cd16 標記率。

4 中性粒細胞功能測定  佛波醇酯(pma,sigma產品,用dmso溶解,配製成1mg/ml,儲存於-20℃,臨用前稀釋)能啟用中性粒細胞,使之釋放活性氧,其中o-2*和h2o2能與化學發光劑luminol(3-氨基苯二甲醯肼,北京化工廠)反應而發光。用lkb-1250發光儀(luminometer)檢測。正常人和pnh患者中性粒細胞,製備成細胞懸液(107 /ml)與 100nmol/l pma 反應,37℃15分鐘,置於冰上終止反應,取含1×105 細胞的啟用液加入到1ml 0.

1nmol/l 的luminol 溶液中,立即測定發光值,每一數值測定3次以上, 取平均值。取正常人的不同細胞數,測定發光值,結果顯示發光值與細胞數有良好的線性關係,說明此方法具有可靠性 (附圖)。

附圖 細胞數與發光值的線性關係

5 細胞培養 以 1×106個細胞/ml的密度接種pmn於imdm培養基(含10%自身血清),37℃、5% co2分別培養12,16,20小時。

6 細胞形態學觀察 不同培養時間的細胞用瑞氏染色,光學顯微鏡下觀察。

7 dna含量分析 取細胞1×106,pbs洗2遍,以70%冷乙醇(4℃)固定12小時以上,用pbs洗去乙醇,加入0.5ml檸檬酸-磷酸緩衝液(ph 7.8)室溫作用5分鐘,離心後以pbs重懸細胞,加入 rnasea (終濃度60μg/ml)37℃作用30分鐘,再加入碘化乙錠(pi,終濃度50μg/ml)4℃暗染30分鐘,以染細胞內總dna,用流式細胞儀分析正常細胞和凋亡細胞,計算凋亡率。

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