1樓:
主要可能是temed和ap的量的問抄題,你可以參考一下我的配方:
分離膠12.5%(sds),10ml體系
分離緩衝:2.5ml
貯膠:4.167ml
純水:3.233ml
10%sds:0.1ml
10%ap:100微升
temed:5微升
————————————————————————濃縮膠5%,4ml體系
濃縮緩衝:1ml
貯膠:0.6ml
純水:2.35ml
10%ap:45微升
temed:15微升
————————————————————————以上配方經本人親用無數次證明切實有效,大概在一小時左右即可凝固,天冷凝得慢可放置於25度烘箱內幫助加速凝固。
2樓:匿名使用者
分離膠一般40來分鐘凝好,濃縮膠一般要90分鐘 想快一些你可以在旁邊放個電爐提高溫度,或多加適量的催化劑。
sds-聚丙烯醯胺凝膠電泳分離血清蛋白質的實驗中,當分離膠加完之後為什麼需要在上面加一層水?
3樓:匿名使用者
加一層水稱為水封
目的是隔絕空氣使催化反應快速進行,進
而形成凝膠,還可使分離膠上版沿平直。
並且權加水後,保持分離膠表面的平整性,使濃縮膠和分離膠都處於同一水平面上。
甘氨酸是為了解離出甘氨酸根離子,甘氨酸根離子可以穩定的介面,使蛋白聚集在移動介面附近,濃縮在一起。
樣品液煮沸這個問題我個人認為是可以商榷的,因為理論上煮沸可以使sds和蛋白更快更好的結合,以便於sds-page的進行。但是有些蛋白似乎不煮沸直接上樣結果更好。對於非還原loading buffer(即不含巰基乙醇)的樣品,一般是不要煮沸的。
長時間的電泳會使正極變酸,負極變鹼。
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