過氧化物酶活性的測定中，結果怎麼處理，酶活性怎麼計算

1樓：向天致信

過氧化物酶活性的測定與計算（比色法）

過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關係，在植物生長髮育過程中，它的活性不斷髮生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內代謝的變化。

一、原理

在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創木酚氧化，生成茶褐色物質，該物質在 470 nm 處有最大吸收，可用分光光度計測量 470 nm 的吸光度變化測定過氧化物酶活性。

二、實驗材料、試劑與儀器裝置

（一）實驗材料：馬鈴薯塊莖。

（二）試劑

1 ． 100 mmol ／ l 磷酸緩衝液 ph7.0 （見附錄）。磷酸氫二鈉。。。。。磷酸二氫鈉。。。。。

2 ．反應混合液： 100 mmol ／ l 磷酸緩衝液（ ph7.0 ） 50 ml 於燒杯中，加入愈創木酚（(鄰甲氧基苯酚） 28 μl ，於磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創木酚溶解，待溶液冷卻後，加入 30 % 過氧化氫 19 μl ，混合均勻，儲存於冰箱中。

（三）儀器裝置

分光光度計，研缽，恆溫水浴鍋， 100 ml 容量瓶，吸管，離心機。

三、實驗步驟

1 ．稱取植物材料1g ，剪碎，放入研缽中，加適量的磷酸緩衝液研磨成勻漿，以 4000 r ／ min 離心 10 min ，上清液轉入 100 ml 容量瓶中，殘渣再用 5 ml 磷酸緩衝液提取一次，上清液併入容量瓶中，定容至刻度，貯於低溫下備用。

2 ．取光徑 1 cm 比色杯 2 只，於 1 只中加入反應混合液 3 ml 和磷酸緩衝液 1ml ，作為對照，另 1 只中加入反應混合液 3 ml 和上述酶液 1ml （如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒錶記錄時間，於分光光度計上測量波長 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 讀數一次。

四、結果計算

以每分鐘吸光度變化值表示酶活性大小，即以 δa 470 /[min · g （鮮重） ] 表示之。也可以用每 min 內 a 470 變化 0.01 為 1 個過氧化物酶活性單位（ u ）表示。

過氧化物酶活性 [u/ （ g · min ） ]=

把ph=7.0和pka2=7.2代入，得c(h2po4^-)=1.585*c(hpo4^2-)

磷酸鹽濃度為0.01mol/l，就是c(h2po4^-)+c(hpo4^2-)=0.01 這樣可解出緩衝溶液中兩種離子的濃度。

c(hpo4^2-) = 0.0039 mol/l; c(h2po4-) =0.0061 mol/l

計算： n(p) = 0.01*1 =0.

01 mol m(nah2po4) = 0.01*120 =1.2g nah2po4 + naoh = na2hpo4 + h2o m(naoh) = 0.

0039*1*40 = 0.156g

稱取無水nah2po4 1.2克， naoh 0.156克，加水溶解，再稀釋至1 l即可。

2樓：竊竊魚魚

首先找一段可以劃成直線斜率（彎曲的就不要了），然後此值乘於提取酶液稀釋倍數，在乘以提取酶液加入緩衝液體積，再乘以比色稀釋倍數，除以所取材料克數…想知道具體公式…把問題補充清楚我再回答吧！

3樓：東南西北過山車

470奈米下測od值，每30秒讀一次數，用90秒的數減30秒的讀數，除以0.01，乘以你的稀釋倍數

4樓：匿名使用者

在470nm波長下測量od值，然後每隔一分鐘讀一次數，以每分鐘的od變化表示酶活性的大小，即△a*稀釋倍數（min*g）表示。

5樓：匿名使用者

我打算來看看想參考下的，你看看回答的都是些什麼呀

6樓：匿名使用者

我也正做這個實驗，看不懂，我找到他，他也不清楚，書是好幾個老師一起編的，每個老師負責不同的實驗，這個實驗不是他搞的，他也記不清楚這個實驗是誰