請問提取細胞核蛋白和漿蛋白提取方法上有什麼不同嗎?是否還可以

2021-03-27 22:11:31 字數 2355 閱讀 2195

1樓:左京壽美子

可以, actin/tublin/gapdh,都行,因為,目標的胞漿蛋白,但是,現在的技術是無法獲取完全的胞漿蛋白,還是要用總蛋白,既然要用總蛋白,那麼,以上提到的內參都行、

western blot 內參 actin 是43還是45 kda

檢測細胞漿蛋白能用actin當內參麼

2樓:

可以,actin/tublin/gapdh,都行,

因為,目標的胞漿蛋白,但是,現在的技術是無法獲取完全的胞漿蛋白,還是要用總蛋白,

既然要用總蛋白,那麼,以上提到的內參都行、

什麼是胞漿蛋白,做wb時用什麼做內參?

3樓:阿魯巴星人

= =胞漿蛋白就是胞漿裡的蛋白啊……用普通的提取方法就好了,網上一搜一大堆……

做胞漿蛋白的話,wb的內參一般為β-actin或者gapdh,主要還是要看你的細胞表達哪一個。

western blot 的內參不一致,急求助

α-平滑肌肌動蛋白是多少kd ;做wb時選的內參可以用β-action 嗎

4樓:紫色學習

α-平滑bai肌肌動蛋白du是23kd。

1、如果是提取

zhi的總蛋白,然後dao做wb,用β-actin或者gapdh做內參肯定是內沒有問題的,這是容公認的東西。

2、如果用膜蛋白提取試劑盒提取蛋白,再用β-actin作為內參似乎不妥,因為理論上來講β-actin在膜上是不表達的。wb能做出β-actin來是因為膜蛋白提取時把胞質蛋白也提出來了。然而,如果我們試驗目的是用藥物處理細胞,比較處理前後某種膜蛋白的表達情況,此時用膜蛋白提取試劑盒提取膜蛋白後再用β-actin做內參似乎就不妥了,因為你根本不知道藥物處理前後混雜了多少的胞質蛋白進來。

如果沒有胞質蛋白混進去的話,β-actin就是檢測不到的。

內參gapdh,b-actin有什麼區別嗎

5樓:皮蛋憨子粥

gapdh和b-actin的區別:

1、定義不同:

gapdh:gapdh或g**dh是甘油醛-3-磷酸脫氫酶。

b-actin:即「肌動蛋白」,是細專胞的一種重要骨架蛋白。

2、分佈屬方式不同:

gapdh:廣泛分佈於各種組織中的細胞。

b-actin:分佈在骨架當中。

3、作用不同:

gapdh:被廣泛用作抽提total rna,poly(a)+ rna,western blot等實驗操作的標準化的內參。

b-actin:β-actin是pcr常用的內參,β-actin抗體是western blot很好的內參指數。

4、結構不同:

gapdh結構:

b-actin結構:

5、應用不同:

gapdh:蛋白印跡法和內參。

b-actin:

生物化學與分子生物學;氨基酸、多肽與蛋白質;細胞生物學。

6樓:匿名使用者

常用的蛋白內參有 beta actin 和 gapdh,它們是有區別的

gapdh分子量為146kd,檢測條帶大約在36kd,beta actin分子量為42kd。一般選擇回內參與要檢測的目的蛋白的分答子量最好相差5kd以上

另外,細胞總蛋白的western blot的內參蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的western blot一般用gapdh為內參

western 內參用的gapdh 和b-actin蛋白的分子量是多少

7樓:mxx米小夕

western 內參用的gapdh分子量為146kd,檢測條帶大

約在36kd,b-actin分子量為42kd。

嚴謹的western blot實驗設計中要內求有良好的參容照體系,這對實驗結果分析是非常有用。要用western blot比較不同條件下或者不同組織中,目的蛋白表達量的相對多少,前提條件是等量的細胞上樣,才有比較的基礎。特別表達量不高時,上樣量的差別就很可能影響結果的分析。

因此需要內參很重要。

8樓:匿名使用者

常用的蛋白內參抄有 beta actin 和 gapdh,它們是有區別的

gapdh分子量為146kd,檢測條帶大約在36kd,beta actin分子量為42kd。一般選擇內參與要檢測的目的蛋白的分子量最好相差5kd以上

另外,細胞總蛋白的western blot的內參蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的western blot一般用gapdh為內參

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