1樓：匿名使用者
我最近也要做mi rna的熒光定量pcr，用u6做內參
，但是苦於沒有找到u6的基因序列（ncbi裡面有好多種，版不曉得哪一個是），寶生物
權那邊以前有現成的u6引物，但現在不生產了，說只能自己提供基因序列，他們設計和合成，哎！想問一下樓主你的u6引物在哪個公司設計和合成的呀？需要提供基因序列麼？
是人的還是小鼠或其他物種的u6？如果方便的話，可否提供一下小鼠的u6基因序列呢?多謝！
2樓：匿名使用者
你做一下標準曲線不就知道了，2小時的事情
請問：做熒光定量pcr時，△△ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼？ 20
3樓：禾鳥
△△ct是熒光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex)，其中，n為擴增反應的迴圈次數，x₀為初始模板量，ex為擴增效率，n為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct（目的基因）-ct（內參基因）；△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多，ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫座標代表起始拷貝數的對數，縱座標代ct值。因此，只要獲得未知樣品的ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
熒光定量pcr的原理：
熒光定量pcr技術：在pcr反應體系中加入熒光基團，通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程，然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中，對全程pcr擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時熒光定量常用的熒光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值：c代表cycle，t代表threshold，ct值的含義是每個反應管內的熒光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
4樓：一生一個乖雨飛
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方。
當然這計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的，平時使用沒什麼問題，如果兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
5樓：匿名使用者
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對熒光定量的一個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方，當然這中計算方法是基於熒光定量的數學計算模型簡化來的，平時隨便用用沒什麼問題，如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
6樓：匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式，方便的話可以給我留一下你的郵箱
熒光定量pcr，實驗組和對照組的目的基因ct值非常相近，兩組內參基因的ct值相差5左右，正常嗎？
7樓：何曼婷囖
回答如下：
不正常。熒光定量pcr通過以內參基因作為標準進行相對定量，即眾所周知的2–δδct 法，（前提是要求在所有測試樣本中恆定表達的已知參照基因，而且表達水平不受研究條件及處理方式的影響）。
如果實驗組和對照組的目的基因ct值非常接近（前提是cdna稀釋的倍數一致）， 說明二者的目的基因無明顯變化呀。
基因作用：
基因有控制遺傳性狀和活性調節的功能，基因通過複製把遺傳資訊傳遞給下一代,並通過控制酶的合成來控制代謝過程,從而控制生物的個體性狀表現。基因還可以通過控制結構蛋白的成分,直接控制生物性狀。
生物體細胞中的dna分子上有很多基因,但並不是每一基因的特徵都表現出來。即使是由同一受精卵發育分化而來的同一人體不同組織中的細胞,如肌肉細胞、肝臟細胞、骨細胞、神經細胞、紅細胞和胃黏膜細胞。
細胞核中的基因在細胞的一生中並非始終處於活性狀態,它們有的處於轉錄狀態,即活性狀態,這時基因開啟,有的處於非轉錄狀態,即基因關閉。
熒光定量pcrct值每次重複相差多少
8樓：
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下：
對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。 首先算加樣量：
delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說。。
熒光定量pcr中關於閾值的設定是否會影響ct值？
9樓：匿名使用者
閾值和基線的設定肯定會影響ct值，你可以採用每次反應完後軟體自己選定的閾值。你也可以手動調整，但是如果你是相同的模板，做不同反應，那你必須使兩次實驗的閾值和基線調到相同。使用相同的標準品，才能減小不同批次反應的誤差。
10樓：
閾值和基線的設定是會影響ct值的，一般儀器會自動對基線和閾值進行優化，一般選用儀器上的設定就可以了。
但有些時候也需要調整，主要根據標準曲線上的斜率，擴增效率和r2值進行調整，將斜率調到合適的位置即可。
當然也可以在每次進行實驗時設定1-2個內參，根據內參調整引數。
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