1樓：法師藥材店
重組時選復擇你的目的制基因上沒有，而質粒的多克隆位點上有的酶切位點，一般重組質粒需要兩個酶，所以你要選擇兩個酶切位點，注意儘量避免使用切出平末端的酶。重組引物設計時首先你要確定你選擇的兩個酶在的酶切位點在質粒的多克隆位點上的排列順序，這個不能錯，不然序列就會接反。一般設計重組引物的時候，在上游引物5』端前面加上載體多克隆位點排列在前面的酶切位點序列，在下游引物5『端前面則加上後面的一個酶切位點，酶切位點加好後，注意5』端還需要加上保護鹼基，這個具體你可以去查下內切酶的說明書。
然後你要注意，根據你的載體需要，是否要在引物上帶上啟動子和終止子。
如何使目的基因與質粒結合形成重組質粒？
2樓：
先用bai同一種限制性核酸內切du
酶切割目的zhi基因和質粒，露出相對dao應的粘性末端，再用回dna連線答酶使兩者的粘性末端結合形成重組質粒。
質粒是目的基因的運載體，在用鳥槍法或人工合成法提取目的基因後，用限制性內切酶將質粒切開，使目的基因與切開的質粒具有相同的粘性末端。它們的鹼基恰好配對，氫鍵自動結合，再用dna連線酶將切口補上，重組質粒就形成了。
擴充套件資料
有兩種情況可使雜交後代出現新的基因組合的個體（重組體）：
（1）非連鎖基因的自由組合。例如純合的非糯紅米水稻品種與糯性白米水稻品種雜交，子二代有四種型別的植株，其中非糯紅米和糯性白米的植株分別與兩親本的性狀相同，稱為親本組合；另有非糯白米和糯性紅米兩種植株則是兩親本所沒有的重新組合，即重組體。
（2）連鎖基因的交換。例如，已知玉米種子的有色對無色為顯性，飽滿對凹陷為顯性，用純種有色飽滿玉米與無色凹陷玉米雜交，子一代種子均為有色飽滿，以f1與雙隱性（無色凹陷）親本回交，結果也出現四種型別，其中有色飽滿和無色凹陷為親本組合，約佔96%；有色凹陷和無色飽滿為新組合（重組體），約佔4%，後者就是同源染色體的非姊妹染色單體上部分基因發生了交換的結果。
3樓：匿名使用者
1、用相同的限制
bai性du內切酶分別處理目的
zhi基因、質粒（目dao的基因兩端有酶切位點）專2、再把兩屬
種片段混合，加入dna連線酶
3、還要篩選，因為有可能得到的不是目的基因+質粒，還可能目的基因+目的基因、質粒+質粒......
望採納哦親~
4樓：匿名使用者
首先質粒和目地基因要有相同的切割位點,再用限制性核酸內切酶切割目地基因和質粒,再把切好的目地基因和質粒用連線酶連線就行了.
構建質粒載體中用pcr獲得目的基因，其中涉及的引物為什麼要加酶切位點？難道不論載體都要加酶切位點嗎？
5樓：匿名使用者
獲得目的基因後一般需要將目的基因連線到質粒載體上，在引物上加酶切位點可以使後續的連線過程簡單、可控。因為可在載體和目的基因上酶切產生相同的切口。也有不需要加酶切位點的t載體，但連線過程效率不高還會有反向的錯誤連線。
6樓：士誠小人也
當然要根據不同的載體來選擇合適的酶切位點了，否則怎麼把目的片段連結到載體上？
7樓：匿名使用者
沒有酶切位點的話怎麼用限制性內切酶處理 沒處理的話怎麼連到載體上
8樓：東晶
那是針對你的目的基因上沒有載體上的酶切位點的情況！
重組質粒構建的注意事項？
9樓：匿名使用者
重組質粒構建是常用的分子生物學手段，其實只是最基本的方法，一般一個星期同時構建三二個組質粒是沒有問題的。在國內先進的實驗中，也大都是由實驗員搞定。但是其中還是有些基本的技巧需要掌握。
在這裡將我的心得分享於大家，這也是我本人幾年來一線工作時的經驗積累，以期能為谷友提供借鑑，讓大家在實驗中少走彎路。所涉及內容如下：
1) 克隆基因的酶切位點問題
2) 載體酶切的問題
3) 連線片段濃度比的問題
在闡明上述問題同時，本人儘可能舉些實驗中的問題案例予以說明。
一、克隆基因的酶切位點問題
1、克隆位點選擇的問題。首先要對目標基因進行酶切位點掃描分析，列出其所含酶切位點清單。然後對照質粒多克隆位點，所選擇的克隆位點必須是目標基因所不含的酶切位點。這是常識，不贅述。
2、保護鹼基數目的問題。在設計pcr引物時，引入酶切位點後，常常要加入保護鹼基，這是大家所熟知的。但是保護鹼基數量多少，可能被新手所忽視。
這種忽視碰可能會大大影響後續的實驗進展。
一般情況下，普通的內切酶只加入兩個保護鹼基，其內切反應就可以正常進行；而有一類，僅僅只加入兩個保護鹼基，其內切反應就不能正常進行，這是因為內切酶不能正常結合dn段上。如ndei就屬這類，需要加入至少6個保護鹼基，常用的hindiii也要三個。
10樓：匿名使用者
選擇合適的內切酶，作用時間和溫度要適宜，連線過程中不要汙染，注意片段和質粒的比例
基因工程中，為什麼切質粒和切目的基因要用同種限制酶
用同種限制酶說明質粒裡面也有和目的基因一樣的基因 這樣說是不正確的。限制酶識別的是鹼基對序列的順序而不是 基因種類 用同樣的限制酶處理目的基因和質粒是為了產生相同的粘性末端，以便可以將兩者連線起來 原理是 鹼基對互補配對 好吧，咱先從啥是基因開始說起吧。目前我們普遍所說的基因是隻具有功能的dna序列...
用來切割質粒和目的基因的酶是否必須為同一種酶為什麼
用來切割bai 質粒和目的基 du因的酶是否必須為zhi同一種酶?dao為什麼這個是不一版定的。要看具體題目,權由於dna連線酶連線的黏性末端互補,所以只要兩種酶產生的黏性末端互補 相同 所以再用dna連線酶就可以 ps 雖然兩種酶識別序列不一樣,但是可能產生互補的黏性末端 你會見到這樣的題目的 必...
目的基因在質粒上，如何將其擴增出來並做實時熒光定量PCR
是這樣的，pcr的原理就不闡述了，實時熒光定量pcr的基本原理是，在pcr體系中，加入引物的同時，加入能與目的基因結合的帶熒游標記的寡核苷酸，一條完整的寡核苷酸上有熒光淬滅基團，它能吸收熒光訊號。dna聚合酶要選擇具有3 到5 外切酶活性的酶，這樣在pcr擴增過程中，從引物方向過來的dna聚合酶會把...