1樓：rain丶
是這樣的，pcr的原理就不闡述了，實時熒光定量pcr的基本原理是，在pcr體系中，加入引物的同時，加入能與目的基因結合的帶熒游標記的寡核苷酸，一條完整的寡核苷酸上有熒光淬滅基團，它能吸收熒光訊號。 dna聚合酶要選擇具有3'到5'外切酶活性的酶，這樣在pcr擴增過程中，從引物方向過來的dna聚合酶會把寡核苷酸一個個切掉，在切掉之後，淬滅基團被破壞，熒光訊號散發出來被儀器接收，每複製一條dna就產生一個熒光訊號，熒光訊號累積就能與pcr產物同步，這樣就是跟蹤pcr產物。
樓主提取質粒以後需要經過一次瓊脂糖凝膠電泳定量，然後對質粒進行稀釋，稀釋到適當濃度，不然無法確定需要加多少dna模版在才能滿足反應體系的要求，引物設計沒有別的要求，只要能完整擴出樓主想要的基因就行。定量的話，根據機器收到的熒光訊號就可以定量了。
以上僅個人愚見。
2樓：哼笨蛋蛋
引物當然要有酶切位點啦，這個是必要的，還需要有保護鹼基還有和目的基因對應的差不多有20個鹼基
熒光絕對定量中標準品指的是什麼，如何獲取
3樓：匿名使用者
標準品一般情況下就是一直濃度的樣品，不管是dna也好，cdna也好。一般就專是整個實驗室在做熒光屬定量時候都會使用這個樣品。不過，要求不是很高，特別是在在相對定量的時候。
在絕對定量是資料分析也有不同，畢竟還有標準曲線可以利用。
4樓：匿名使用者
標準品指的是已知拷貝數的核酸，簡單點說就是已知量的dna。
獲取方法是通過一些儀器及方法測得dna含量，換算成拷貝數，再進行梯度稀釋，即可得到標準品
rt-pcr出一段目的基因，為什麼要把它先ta克隆呢？為什麼不能直接把它連線到相應的質粒上呢
5樓：匿名使用者
確實可以不一定要ta克隆。
你可以在設計引物的時候在引物的5'端加上酶切位點，比如你選中***yyy位點你可以把引物設計為aa－***yyy－agct(agct 代表你原來的引物序列）.我一般在頭上加2個a，這樣酶切效果好一些。兩個引物可以加相同，也可以不同酶切位點。
取決於2點：
1。擴增區沒有該位點，（必須知道你擴增區的序列）2。對應於你的目標分子。
ta克隆的好處在於選擇靈活，萬一一個位點不好使，同一批質粒還可以用其他酶再切。隨時可以擴增。還有方便下游作業，比如說你要連線兩端pcr產物，先克隆會比較方便一些。
所以2種方法各有優缺點，你可以根據情況選用。
6樓：我愛昌君
ta克隆效率比較高，而且如果目的基因序列不明，那麼就無法恰當的選擇內切酶，所以一般ta克隆後測序，然後再用酶切。
把目的基因連線到質粒上構建重組質粒時該如何選擇限制性內切酶？引物如何設計
重組時選復擇你的目的制基因上沒有，而質粒的多克隆位點上有的酶切位點，一般重組質粒需要兩個酶，所以你要選擇兩個酶切位點，注意儘量避免使用切出平末端的酶。重組引物設計時首先你要確定你選擇的兩個酶在的酶切位點在質粒的多克隆位點上的排列順序，這個不能錯，不然序列就會接反。一般設計重組引物的時候，在上游引物5...
基因工程中，為什麼切質粒和切目的基因要用同種限制酶
用同種限制酶說明質粒裡面也有和目的基因一樣的基因 這樣說是不正確的。限制酶識別的是鹼基對序列的順序而不是 基因種類 用同樣的限制酶處理目的基因和質粒是為了產生相同的粘性末端，以便可以將兩者連線起來 原理是 鹼基對互補配對 好吧，咱先從啥是基因開始說起吧。目前我們普遍所說的基因是隻具有功能的dna序列...
用來切割質粒和目的基因的酶是否必須為同一種酶為什麼
用來切割bai 質粒和目的基 du因的酶是否必須為zhi同一種酶?dao為什麼這個是不一版定的。要看具體題目,權由於dna連線酶連線的黏性末端互補,所以只要兩種酶產生的黏性末端互補 相同 所以再用dna連線酶就可以 ps 雖然兩種酶識別序列不一樣,但是可能產生互補的黏性末端 你會見到這樣的題目的 必...