1樓：蠢羊羊
如果是革蘭氏陰性菌比如大腸桿菌還好，陽性菌幾乎不能成功，因為有很厚的胞壁沒法破壁。而陰性菌成功率也不是很高，就用牙籤在菌落上挑一點到pcr體系裡。但要考慮的是即使鑑定出轉化子後你怎麼儲存這個菌落？
再回板上找那個被挑過的殘存菌落嗎？與其這樣不如多花幾個小時搖菌液再pcr吧
2樓：匿名使用者
不是特別明白你所提出的問題， 能specific一點嗎？
根據我的理解， 你所說的是在做完transformation之後把接種的細菌塗盤， 其中理論上吞噬表達了目標質粒的細菌可以存活， 第二天當菌種長得肉眼可見的時候， 塗抹一點點用來做目標質粒的pcr， pcr成功的表明實驗成功， 請問你問的是這個問題嗎？
如果是假陽性不高， 基本上是一種用來快速screening的辦法， 就是篩選出很可能成功的菌落。 當然最後的**標準仍舊是miniprep之後做sequencing了。
做法就是統一配master mix， 也就是包含buffer， mgcl2， primer forward, primer reverse， ddntp， taq， 混勻後平均到pcr tube裡面， 之後每個菌落標號號碼， 用tip的尖稍微抹一點點就好了。 注意抹的時候要在本生燈下做， 要小心點避免汙染。 然後按照標號放pcr tube裡面。
之後pcr然後跑膠就ok了。
我在國外讀書， 學的都是英文的， 說的如果不太貼切或者是理解錯誤請見諒。
菌落pcr的操作步驟及儀器有哪些？
3樓：匿名使用者
1.取15-20ul tris-hcl 放到編好號的0.5ml 的ep管中
2.用滅菌牙籤，或槍頭，沾取少量菌體（多了效果不好）3.並將槍頭或牙籤在剛取出來的tris-hcl中涮一下，可以看到溶液略微變渾濁
4.蓋上管蓋，100c煮沸5-10min
5.離心，取1-2ul上清配製pcr反應體系。如果菌體較多，則取0.5ul就夠了
6.設定pcr儀程式，進行反應
7.結果電泳檢測即可
4樓：匿名使用者
菌落pcr要菌長的足夠大，一半搖菌儲存，另一半做pcr
菌斑一般用滅菌的槍頭在超淨臺挑取即可，在lb（搖菌用）和pcr反應液裡蘸一下即可。
反應液按正常反應體系加就可以，全程在冰上操作，加完後稍離心，然後設定好pcr儀的反應程式，進行反應。結果跑一下電泳即可。
5樓：阿扁床單
1.配置pcr反應體系，分裝於八連管中
2.在超淨臺裡用滅菌牙籤佔取少量菌體，將牙籤放在八連管液體中涮一下
3.設定pcr儀，進行反應
酵母菌落pcr怎麼做
6樓：北京索萊寶科技****
菌落pcr就是直接用懸浮的菌液作為pcr的模板加上primer dntp和酶 buffer直接搞pcr
pcr的條件要有所改變
我的經驗是把第一步的保溫時間延長到20min,可以破壞掉細胞.
然後迴圈的時間照舊.
（僅供參考）
菌落pcr和菌液pcr在原理和操作方面有什麼區別
7樓：匿名使用者
如果轉化成功的話，菌落裡的菌就含有你克隆的質粒載體了，用槍頭直接碰一下，然後作為pcr模板，就可以進行pcr擴增了。但是菌落pcr鑑定的假陽性率其實也不低，所以建議你挑取菌落擴培之後抽提質粒，進行酶切鑑定，這樣比較準確，酶切鑑定確認好之後再去測序以確定沒有鹼基突變或缺失。
你說的t7通用引物是指載體上的t7 promtor引物嗎？那只是一條引物啊，如果加上gbh下游引物的話，擴增出來的就是你連線進去的目的基因的長度了。
菌落PCR用在鑑定酵母整合gene的轉化子可信麼
因為加bai入過多的酵母細胞,反而抑制du了pcr反映的進行。後來用zhi dao5 dmso處理,結果很好,可以清楚地看內見兩條帶,和expression kit上面說容的也吻合 sali線性化his mut 佔大部分 10 14個測試菌落。萬分火急 轉化子的菌落pcr原理是什麼?如果轉化成功的話...
目的基因的擴增曲線,都怎麼看,定量pcr目的基因擴增曲線不好但是ct值很高怎麼回事
你好,擴增曲線可以粗略地判斷擴增效率。sybr green的雙delta ct法要求目的基因和內參的擴增效率基本一回 致。如果答不一致,需要對公式進行修正,部分qpcr儀的配套軟體可以做到,直接輸入每對引物的擴增效率。但無論如何,保證高擴增效率是實驗成功的關鍵。如果擴增效率一致,不同ct的曲線顯示出...
做PCR所要用到的緩衝液，這緩衝液指的是什麼
就是給pcr提供的一個最適酶催反應條件。不同公司的buffer緩衝液都是不一樣的，像離子濃度 ph等都有很大的差別。我們實驗室用的是諾唯讚的pcr酶，上次我好奇打了他們的技術 大概都有些kcl mgcl2 nh4 2so4 tris hcl等。希望對你有幫助！pcr中緩衝液和酶從冰箱取出後應有什麼操...