1樓：一口吃掉一個
就是給pcr提供的一個最適酶催反應條件。不同公司的buffer緩衝液都是不一樣的，像離子濃度、ph等都有很大的差別。我們實驗室用的是諾唯讚的pcr酶，上次我好奇打了他們的技術**，大概都有些kcl、mgcl2、(nh4)2so4、tris-hcl等。
希望對你有幫助！
pcr中緩衝液和酶從冰箱取出後應有什麼操作？
2樓：
肯定不對了，taq酶是不會結冰的，buffer如果凍住的話最好的辦法是放在4度冰箱裡凍融。我一般是拿在手裡把它融了。你要是用水浴啊什麼的溫度不能太高，千萬不能用什麼電爐啊，微波爐一類的，因為可能會溫度太高。
一般把做pcr的這些試劑拿出來之後要放在冰裡，用的時候拿出來，用完還是要放到冰裡面去的。
3樓：小乖vs木登
因為加熱會使酶變性。buffer可以用手唔化，酶可以放在冰上，不過時間不能過長，但最好還是用的時候再拿出來。
4樓：
緩衝液利用手的溫度握在手裡融化就行了，酶的話由於加了甘油，所以是液體狀的，等其他試劑全加好了，在加酶，用完馬上放回去就行了
pcr反應需要在一定的緩衝液中進行緩衝液相當於細胞質基質嗎？
5樓：匿名使用者
pcr反應的緩衝液的作用是給taq dna聚合酶提供一個最適酶催反應條件。
可以類似於細胞質基質的概念。
pcr擴增為什麼要在一起當中加入緩衝液
6樓：匿名使用者
加入緩衝液主要是為酶提供需要的相關ca2+以及其他輔助因子，以模仿其最適的擴增條件
pcr技術中的緩衝液
7樓：武警指揮學校
聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction , pcr）是體外擴增dna序列的技術。它與分子克隆和dna序列分析方法幾乎構成了整個分子生物學實驗工作的基礎。在這三種技術中，pcr方法理論上出現最早，實踐中應用也最廣泛。
pcr技術使對微量的核酸（dna或rna）操作變得簡單易行，同時還可以使核酸研究脫離活體生物。pcr技術的發明是分子生物學的一項革命，它極大地推動了分子生物學以及生物技術產業的發展。
pcr技術發展簡史
人類對於核酸的研究已經有100多年的歷史。20世紀60年代末70年代初，人們致力於研究基因的體外分離技術。但是，由於核酸的含量較少，一定程度上限制了dna的體外操作。
khorana於2023年最早提出核酸體外擴增的設想。但是，當時的基因序列分析方法尚未成熟，對熱具有較強穩定性的dna聚合酶還未發現，寡核苷酸引物的合成仍處在手工、半自動合成階段，這種想法似乎沒有任何實際意義。
2023年，美國科學家kary mullis在高速公路的啟發下，經過兩年的努力，發明了pcr技術，並在science雜誌上發表了關於pcr技術的第一篇學術**。從此，pcr技術得到了生命科學界的普遍認同，kary mullis也因此而獲得2023年的諾貝爾化學獎。
但是，最初的pcr技術相當不成熟，在當時是一種操作複雜、成本高昂、「中看不中用」的實驗室技術。2023年初，keohanog通過對所使用的酶的改進，提高了擴增的真實性。爾後，saiki等人又從生活在溫泉中的水生嗜熱桿菌內提取到一種耐熱的dna聚合酶，使得pcr技術的擴增效率大大提高。
也正是由於此酶的發現使得pcr技術得到了廣泛地應用，使該技術成為遺傳與分子生物學 分析的根本性基石。在以後的幾十年裡，pcr方法被不斷改進：它從一種定性的分析方法發展到定量測定；從原先只能擴增幾個kb的基因到目前已能擴增長達幾十個kb的dn**段。
到目前為止，pcr技術已有十幾種之多，例如，將pcr與反轉錄酶結合，成為反轉錄pcr，將pcr與抗體等相結合就成為免疫pcr等。
pcr技術的基本原理和操作
1. pcr的基本原理
pcr的基本工作原理就是以擬擴增的dna分子為模板，以一對分別與模板互補的寡核苷酸片段為引物，在dna聚合酶的作用下，按照半保留複製的機理沿著模板鏈延伸直至完成新的dna合成。通過不斷重複這一過程，可以使目的dn**段得到擴增。另一方面，新合成的dn**段也可以作為模板，因而pcr技術可使dna的合成量呈指數型增長。
2. pcr的基本成分
pcr包括7種基本成分：模板dna、特異性引物、熱穩定dna聚合酶、脫氧核苷三磷酸（dntp）、二價陽離子、緩衝液及一價陽離子。
模板dna：包括基因組dna、質粒dna、噬菌體dna、預先擴增的dna、cdna和mrna分子等幾乎所有形式的dna和rna都能成為pcr技術反應的模板。除此之外，pcr反應還可以直接以細胞為模板。
特異性引物：是一段與模板dna鏈結合的寡核苷酸片段，對於dna的擴增起到引發的作用。
熱穩定dna聚合酶：這是pcr技術實現自動化的關鍵。熱穩定dna聚合酶是從兩類微生物中分離的：
一類是嗜熱和高度嗜熱的真細菌，另一類是嗜熱古細菌。現在又出現了一種兼顧了幾種dna聚合酶特點的混合型酶。
脫氧核苷三磷酸（dntp）：是dna合成的原料，包括datp、dgtp、dttp、dctp。
二價陽離子：常用到zn2+和mg2+,作為構成熱穩定性dna聚合酶的成分之一。
緩衝液：一般使用tris-cl緩衝液，標準的為10mmol/l,並將其調節到8.3~8.8之間。
一價陽離子：一般使用50mmol/l的kcl溶液，有利於改善擴增的產物質量。
pcr的基本操作
pcr是一種級聯反覆迴圈的dna合成反應過程。pcr技術的基本反應由三個步驟組成：
1. 變性：通過加熱使模板dna完全變性成為單鏈，同時引物自身和引物之間存在的區域性雙鏈也得以消除；
2. 退火：將溫度下降至適宜溫度，使引物與模板dna退火結合；
3. 延伸：將溫度升高，熱穩定dna聚合酶以dntp為底物催化合成dna鏈延伸。
以上三部為一個迴圈，新合成的dna分子又可以作為下一輪合成的模板，經多次迴圈後即可達到擴增dn**段的目的。
pcr的主要應用
最初建立pcr是為了擴增已知序列的靶基因。因為在pcr方法問世以前，要獲得一個靶基因，必須建立基因檔案庫，然後從成千上萬的菌落中通過southern blot 雜交篩選含有靶基因的克隆。這樣既費時又費錢，特別是在克隆真核生物基因時難度更大。
自從建立了pcr方法以後，使克隆已知序列的基因變得非常容易。為了適應分子生物學的快速發展，pcr方法也得到了不斷髮展，現在pcr已應用到生命科學的各個領域。
1. 基礎研究方面的應用
目前從事分子生物學的實驗室和研究人員，幾乎每天都在使用pcr，可以說幾乎沒有一個分子生物學家沒有使用過pcr。因此，pcr與分子克隆一樣是分子生物學實驗室的常規方法，可用於達到以下目的：
l 擴增目的基因和鑑定重組子；
l 克隆基因；
l 基因功能和表達調控的研究；
l 基因組測序；
l 製備單鏈模板；
l 致突變；
2. pcr在臨床上的應用
l 在遺傳學上的應用：人類的遺傳性疾病是因為某一鹼基序列發生了突變，使之缺失或形成某一限制性內切酶的識別位點，通過pcr結合限制片段長度多型性分析（pcr-rflp），就可以從基因的水平對遺傳性疾病進行分析。例如，血友病甲是一種常見的遺傳性出血性疾病，患者體內缺乏凝血因子fviii這是由於基因第14個外顯子的第336位氨基酸的編碼基因發生了突變，產生了一個新的psti酶切點，因此可以使用pcr-rflp對血友病進行診斷。
pcr還可以用來檢測遺傳性耳聾和leber遺傳性視神經病。
l 在腫瘤研究中的應用：pcr已日益廣泛應用於腫瘤的**與發病機理研究以及腫瘤診斷與**的研究中。例如，差異顯示pcr技術能針對不同腫瘤尋找其特異而敏感的標誌物，並用於腫瘤早期診斷、判斷預後及療效評估。
另一方面，在使用普通放療、化療的同時可結合定量pcr技術檢測微小殘留病灶，以進一步改進**方案。此外，由於癌症的發生在一定意義上是單個細胞分子發生變化，因而可以使用單細胞pcr技術對癌症的發病機理進行研究。
l 檢測病原體
l 在基因分型中的應用：當進行器官移植時並須先組織配型工作，此時常應用序列特異性寡核苷酸多型性pcr（pcr-sequence specific oilgonucleotide polymorphism,pcr-ssop）對人類白細胞抗原（human leukocyte antigen,hla）進行分型，使移植成功率大大提高。此外pcr-限制性片段長度多型性也可以用於對hla的分型。
3. 在法醫學中的應用
例如：最早應用dna限制性片段長度多型性結合pcr-rflp來進行法醫學個體識別和親子鑑定。目前發現在真核生物基因組編碼和非編碼序列中的短串聯重複序列的重複次數在個體間存在著差異，因此可以使用短串聯重複pcr技術對其進行分析。
使用pcr技術進行法醫鑑定的優點是樣品用量小並且適於對高度降解材料的檢測。除剛才提到的之外，可變數目串聯重複序列（variable number tandem repeat,vn-tr）pcr也可以用於法醫學個體識別和親子鑑定。
所以，綜上所述，pcr的確是一種分子生物學研究的基礎技術。在它30多年的發展中衍生出了諸如pcr-rflp、pcr-ssop、vn-tr，以及免疫pcr、致突變pcr和定量pcr等十幾種不同的技術方法。pcr技術可以為基因工程提供目的基因，並廣泛地應用於個體識別、親子鑑定、免疫配型、疾病診斷等方面。
可以說，pcr已經滲透到了生命科學的各個領域。21世紀是生物工程的世紀。我相信，在今後的發展中pcr技術會不斷地得到擴充和完善，pcr技術也將發揮著越來越重要的作用。
pcr中ph緩衝液的作用？
8樓：雲夢澤
第一，pcr緩衝液就是給pcr反應提供的一個最適酶催反應條件。
第二，例如緩衝液中的鎂離子在酶催化過程中，結合到酶－底物結合體上，從而使催化反應的活化能更加降低。使得反應能夠進行。
第三，ph緩衝液是保證pcr反應正常進行的關鍵條件之一。
pcr所用的緩衝液和酶為什麼分裝成小份
9樓：當年雲霧裡
緩衝液可以迅速融化,只要不是含有atp（比如t4的buffer）等容易降解的物質都不用太擔心.我做實驗如果等不及就直接把它放在heater上,到那時要注意不能加熱,化了就好,酶是絕對不能加熱的,否則很容易失活,再說酶也不會被凍住,無所謂化不化的問題.尤其是反覆得從-20拿出來再放回去,即使是放在冰盒上,時間久了真的會失活,我們實驗室的t4連線酶就是這麼失活的.
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