1樓：法師藥材店
當然是可以直接將目標基因pcr後直接連到表達載體上的。但實際上在操作過程中，我們都是推薦先將目標基因的pcr產物連線到克隆載體上後再用於構建表達載體。原因是首先如果是未知序列的話，需要用克隆載體來對這段序列進行測定，然後好確定序列中的酶切位點，為下一步表達載體的構建策略提供必要的資訊。
然後，即使是序列很確定的基因，一般也會先裝在克隆載體上。主要是因為你沒辦法保證你的序列的重複性。如果直接用pcr產物的話，由於你的模板並不一定是完全一致的，即使有少量的mrna有鹼基錯配，很有可能就在pcr反應中這些錯誤的mrna反轉錄的cdna就被無限放大了，這樣你連上去的序列就不一定準確了。
但如果是裝入克隆載體的序列，從克隆載體上獲得的序列就有絕對的一致性，這樣結果才有說服性。最後一點就是，連在克隆載體上的片段是很穩定的，你以後進行實驗的時候還能保證可以獲得完全一致的片段。但如果重新rt-pcr，這結果就有機率不同了。
當然，對於已知序列直接pcr產物連線表達載體是很少機率出錯的，這樣做實際上是為了實驗結果的嚴謹。
2樓：匿名使用者
一是測序方便，有通用引物嘛~二是提高連線效率~
3樓：匿名使用者
酷似是為了測序方便，有時候表達載體不能進行測序，或者說不方便，就需要經過一次亞克隆。當然，如果表達載體可以用通用引物測序就可以一步到位進行連線，測序證實沒有突變就可以去表達了。
pcr產物能直接用於連線表達載體麼
4樓：南京金益柏生物科技****
標準的dn**段與載體連線就是通過pcr的電泳**膠進行，你說連線失敗，給你三個可能的原因和對應的解決辦法，供你參考，第一，pcr電泳膠**率最好的才達到80%，所以你可能**的時候由於量太少，連線失敗，對應的解決辦法就是你多做幾管pcr，比如10管，然後把10個電泳結果統一**後放入一個1.5mlep管內，提高量來解決；第二，你的載體是否切開，很多時候如果你的載體如果由於酶失效，識別位點不對等原因，根本沒被酶切開，你怎麼插入呢，對應的解決辦法就是，證實一下你的酶切是否成功，沒成功就考慮換酶，驗證方法是，酶切後用進行電泳，陽性參照就是酶切前的質粒額，切開的載體會跑的最快；第三，連結酶之類的如果出現問題，或者某些環節出現錯誤，你的目的片段與載體沒有連結上，那麼你還是無法實現表達，給你對應的檢測辦法是，用你的引物擴增連線完的目的片段，同時連結目的片段之前的質粒做陰性對照，如果發現連結目的片段的質粒無法通過pcr得到你的目的片段，那麼就是說連結酶可能出現錯誤。
基因工程為何要先構建克隆載體然後後構建表達載體能否在獲得cdna後直接連到表達載體上
5樓：匿名使用者
你得到的cdna的量是很少的，先放在克隆載體上是為了獲得更多的你所需要的cdna，這樣做的話不至於在做完實驗後突然發現你要的那個cdna被你用完了，然後你又要重新再去很複雜的提取
6樓：小蠻
可以的。克隆載體只是說拷貝出更多基因，提高效率。也有的表達載體可以直接連pcr產物的。
7樓：念靈凡
基因工i程流程圖 。 您可以2去看看至於v**您還是自己e去問測序公3司吧。各家的都部一w樣的
2011-10-26 4:39:19
為什麼pcr產物可以直接連t載體
8樓：匿名使用者
普通的taq聚合酶會在pcr反應過程中在3』末端加入一個鹼基a，線性化平末端t載體的兩端分別又人工加上一個額外的t鹼基，從而可與pcr克隆產物的a末端互補配對，提高了pcr產物連線和克隆的效率。
常用的目的基因載體有哪些
9樓：虢和悅終掣
作為基因工程的載體應該具備標記基因、多個限制性內切酶切點、能夠在宿主細胞內複製和穩定存等特點．常見的載體種類有質粒、動植物病毒、噬菌體．細菌核區的dna不能作為運載目的基因的載體．
10樓：裘泰然隨穹
有兩種常用的方法。第一種是直接將pcr擴增的基因片段酶切，然後連線到酶切過的表達載體上。第二種是先把pcr產物連到過度載體上，再從過度載體搶切下目的基因，最後再連線到酶切過的表達載體上。
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