1樓：匿名使用者
設計引物軟體很多，常用的為primer prim'er 、oligo。
要考慮g、c含量，二聚體、髮卡結構、tm值等，可以搜尋「引物設計原則」詳細瞭解！
另外，不同的引物（簡併引物、特異性引物等等）注意點不太一樣。
2樓：
我一般是用genetool 設計引物的，如果引物成髮卡結構或者正反引物容易相互配對，這個軟體都會提示。
注意事項：
1.gc含量和at含量最好相同。
2.引物的5'和3'端最好是g或c，因為是三個氫鍵，結合比較好。
3.正反引物長度最好一致（20bp左右），gc含量一致，退火溫度一致。
4.引物最好不含有大量的連續相同鹼基，例如：3'-aaaaaaatttttt-5'
5.你要測序嗎？這個要看你的測序機子質量。引物一般要設計在目標片段前後各50bp以外的地方。
6.如果目標片段太長，需要分段設計引物來測序。
3樓：匿名使用者
很複雜的，才給這麼點分
4樓：檢依白蔣賜
pcr引物又稱為寡核苷酸引物，也就是rna，是由人工合成的，pcr引物通常是一對，引物1和引物2。由於dna聚合酶只能從核苷酸鏈的5'端到3'端進行復制，也就是隻能識別3'的尾端，而且只能把核苷酸連到已經和dna模板互補產生的多核苷酸鏈上，所以引物1和2分別於雙鏈dna的兩條鏈的尾部（就是末尾是3'端的那一邊）結合，為那些脫氧核苷酸提供3'的末端，就相當於開了個頭。然後在dna聚合酶的作用下合成兩條新鏈。
而那段引物就成了新鏈的一部分。
其實在生物體內的dna複製也是這樣的一個過程，只是引物是人體自身合成的
引物設計原則
*序列選取應在基因的保守區段
*避免引物自身或與引物之間形成4個或4個以上連續配對，避免引物自身形成環狀髮卡結構
*典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證序列獨特性，並降低序列存在於非目的序列位點的可能性。但是長度大於24核苷的引物並不意味著更高的特異性。
較長的序列可能會與錯誤配對序列雜交，降低了特異性，而且比短序列雜交慢，從而降低了產量。
*tm值在55－65℃（因為60℃核酸外切酶活性最高），gc含量在40%－60%
*引物之間的tm相差避免超過2℃
*引物的3』端避免使用鹼基a，引物的3』端避免出現3個或3個以上連續相同的鹼基
*為避免的擴增，引物設計最好能跨兩個外顯子。
*taqman探針技術要求片段長度在50bp－150bp
*引物末端（最後5個核苷酸）不能有超過2個的g和c。
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博凌科為 為你解答 抄 我最近正襲在做基因的克隆,我一直比對cds,比對之後,找到保守區,再在primer 軟體中設計引物,找那些評分相對較好的引物,在看它是不是在你比對的保守區,如果實在是找不到合適的,就儘量滿足,就設計兼併引物了,找到與模版不同的鹼基,按照兼併原則設計即可 各位大神,求助大神們怎...