1樓：北京索萊寶科技****
實驗原理：流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細胞柱。
通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測，得到該細胞的光散射和熒光指標，分析出其體積、內部結構、dna、rna、蛋白質、抗原等物理及化學特徵。
細胞內的dna含量隨細胞週期程序發生週期性變化，如g0/g1期的dna含量為2c，而g2期的dna含量是4c。利用pi標記的方法，通過流式細胞儀對細胞內dna的相對含量進行測定，可分析細胞週期各時相的百分比。
請教細胞週期分析原理和分析結果解釋
怎麼分析pi staining 細胞週期
2樓：回家種紅薯去不
pi單染檢測細胞週期
原理：碘化丙啶(propidium ，簡稱pi)是一種雙鏈dna的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈dna結合後可以產生熒光，並且熒光強度和雙鏈dna的含量成正比。
細胞內的dna被碘化丙啶染色後，可以用流式細胞儀對細胞進行dna含量測定，然後根據dna含量的分佈情況，可以進行細胞週期和細胞凋亡分析。
操作步驟：
1、對於懸浮細胞，直接離心收集細胞，棄上清，在4 ℃、1200rmp下用預冷的pbs洗細胞兩次；對於貼壁細胞，先用不含edta的0.25%的胰酶消化再離心收集細胞；
2、加入預冷的70%乙醇（pbs配製），於4℃固定過夜，或-20℃長期固定；
3、離心收集細胞，以1 ml預冷的pbs洗細胞一次，加入預冷的 pbs重懸細胞，調整細胞濃度為1.0×106，取出100 ul細胞懸液，加入rnase a酶，使rnase a終濃度為1 mg/ml，混勻後37 ℃水浴30 min；
4、加入pi綜合染色液，使pi終濃度為50 ug/ml，混勻，4℃冰箱避光儲存；
5、300目尼龍網過濾後，上機檢測。
注意事項：
1、細胞濃度一定要≧1×106/ml，特別是陰性對照管細胞量要大一些，以便樣品電壓調節；
2、必須保證被檢測樣品為單細胞懸液；
3、如果樣品細胞為培養的貼壁細胞，將上清轉入離心管（其中含有脫落的凋亡細胞），與不含edta的胰酶消化的細胞合併後離心收集細胞；
4、在細胞固定時一定要將細胞吹開，吹成單細胞懸液；
5、rnase與pi綜合染液分開的原因是rnase的作用最適溫度是37℃，而不是4℃，所以與教材有所不同；
6、pi綜合染液不能用蒸餾水配，否則細胞全部溶解，造成結果不可靠；
7、4℃過夜一般隔天就進行檢測，如果想推遲幾天測，那就儲存在-20℃，有資料顯示-20℃可以至少儲存一個月；
8、70%~75%的酒精都可以用於pi單染固定。
細胞週期檢測方法即pi法的操作步驟
處理pi染色 細胞週期資料
3樓：匿名使用者
不管看哪個圖，只要是加藥處理組和對照組之間相比較s期減少了，就可以說明阻滯了其增值，但是想要看阻滯在週期中的哪個環節就要分析一下對應比例的上調和下調。還有就是一定要記得同步化。
4樓：浦恐
主要觀察g1/s期的比例是否增高。增高顯示細胞開始脫離細胞週期進入g0期。此外也可參考s/g2期比例是否下降。具體可參考維普上的文獻，說的都很清除。
5樓：匿名使用者
看不懂啊！是大學的嗎？我只有高中水平啊，請恕我無能為力了。
流式細胞術pi染色求助
6樓：匿名使用者
不知道你具體問什麼，先參考一下我前面對pi的這個回答吧：
pi 是 propidium iodide的縮寫，該染料能和核酸鏈結合後，被激發發出熒光。
其實並不是檢測凋亡，而是檢測的細胞膜的完整性。完整的細胞膜對pi沒有通透性，pi不能進入細胞內和核酸結合，所以細胞不能被染色。只有細胞發生了凋亡，或者壞死，或者人為因素，比如胰酶消化，吹打，刮取等等操作，損傷了細胞膜。
這樣的細胞就會被染色了。
所以pi本身並不是一個用來顯示凋亡的特異性的染料。假陽性很多。一般最多用來做初步篩選，如果要確認確實是凋亡的話，需要其他方法。
pi的目的就是判斷細胞膜的損傷，和凋亡並不是對應關係。
求細胞週期檢測方法：pi法操作步驟
7樓：匿名使用者
1、 0.25%胰酶（無edta）消來化，將細胞消化成單源個。（必須消化成單個）。
2、離心收集細胞，棄上清，用預冷pbs洗細胞兩次（加3ml，吹懸，離心，棄上清算洗一次）。
3、加入3ml預冷（-20度）70%乙醇到細胞沉澱中，於4度固定過夜（或者，如果實驗週期長可以-20℃長期固定）。
4、離心收集細胞，以3ml的pbs洗細胞兩次，加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠（pi），100ug/ml rnase a， 0.2% triton x-100， 4℃避光孵育30分鐘。
5、送實驗室，上機
8樓：周婷金偉
1、 0.25%胰酶（無baiedta）消化，將du
細胞消化成zhi單個。（必須消化成單個）。2、離心dao收集細胞，棄上清，專用預冷pbs洗細胞兩次（屬加3ml，吹懸，離心，棄上清算洗一次）。
3、加入3ml預冷（-20度）70%乙醇到細胞沉澱中，於4度固定過夜（或者，如果實驗週期長可以-20℃長期固定）。4、離心收集細胞，以3ml的pbs洗細胞兩次，加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠（pi），100ug/ml rnase a， 0.2% triton x-100， 4℃避光孵育30分鐘（pi我是直接用pbs配成工作濃度，然後加入細胞沉澱混勻，rna酶現加，但有時不加發現對實驗結果也沒太大的影響）。
5、送6樓中心實驗室，上機
流式細胞術的作用原理
9樓：匿名使用者
流式細胞術（flow cytometry, fcm）是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞，並能同時從一個細胞中測得多個引數，與傳統的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準確性好等優點。
將待測細胞染色後製成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的磷流式細胞術酸緩衝液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過檢測區域。
流式細胞儀通常以鐳射作為發光源。經過聚焦整形後的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在鐳射束的照射下，產生散射光和激發熒光。這兩種訊號同時被前向光電二極體和90°方向的光電倍增管接收。
光散射訊號在前向小角度進行檢測，這種訊號基本上反映了細胞體積的大小；熒光訊號的接受方向與鐳射束垂直，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，形成多個不同波長的熒光訊號。
這些熒光訊號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度，經光電倍增管接收後可轉換為電訊號，再通過模/數轉換器，將連續的電訊號轉換為可被計算機識別的數字訊號。計算機把所測量到的各種訊號進行計算機處理，將分析結果顯示在計算機螢幕上，也可以列印出來，還可以資料檔案的形式儲存在硬碟上以備日後的查詢或進一步分析。
檢測資料的顯示視測量引數的不同由多種形式可供選擇。單引數資料以直方圖的形式表達，其x軸為測量強度，y軸為細胞數目。一般來說，流式細胞儀座標軸的解析度有512或1024通道數，這視其模數轉換器的解析度而定。
對於雙引數或多引數資料，既可以單獨顯示每個引數的直方圖，也可以選擇二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體檢視。
細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現的。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體，充電後振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測定細胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負不同的電荷，當液滴流經帶有幾千伏特的偏轉板時，在高壓電場的作用下偏轉，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實現細胞的分離。
怎樣利用PI單染色法進行流式細胞儀檢測細胞凋亡
這個方法看凋亡，主要是看sub g1期的細胞數量。原理就是凋亡的細胞，由於dna正在降內解，所以含量比正容 常細胞要少。在以pi熒光強度 代表dna量 為橫座標的柱狀圖上，一般會有2個峰，g1和g2，g1就是正常細胞，g2是正在 的2倍體。2者間是s期細胞。如果有凋亡的細胞，在g1前會有細胞出現，就...
細胞增殖wst1z結果怎麼分析，流式細胞週期結果 怎麼分析
還是比較常用的.但是因為mtt 相對cck 8試劑盒更便宜,實驗室更較多采用專mtt法.cck 8法更靈敏,而且不用 屬用dmso溶解,減少接觸有毒試劑的機會.96孔板培養細胞,檢測時每孔加入10 培養基體積的cck 8,在細胞培養箱中繼續孵育0.5 4個小時,時間的長短根據細胞的型別和細胞的密度等...
請問有誰能提供用流式細胞儀檢測CD4 CD25 CD127l
你需要6種抗體 cd4 標記熒光1 cd25 標記熒光2 cd127 標記熒光3 加上標記了三種對應熒光的同型非特異抗體。先用同型非特異抗體分別染色的細胞調節陰性閾值。然後再用已知陽性 或者是對應熒光相同的珠子 的細胞調節機器的光譜代償。然後檢測染色的樣本。先在點陣圖設好cd4，cd25雙陽性，然後...