1樓：彈指破蒼穹
藍白斑篩選的原理 分類:生物科學藍白斑篩選是重組子篩選的一種方法： 是根據載體的遺傳特徵篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。
現在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的dna的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacz）的調控序列和前146個氨基酸的編碼資訊。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（mcs），它並不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用於可編碼β-半乳糖苷酶c端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。
這樣，lacz基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。由α-互補而產生的lacz+細菌在誘導劑iptg的作用下，在生色底物x-gal存在時產生藍色菌落，因而易於識別。然而，當外源dna插入到質粒的多克隆位點後，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。
這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。如用藍白斑篩選則經連線產物轉化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養12-16hr後，有重組質粒的細菌形成白色菌落
2樓：南京華廈白癜風研究所
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基因克隆中藍白斑篩選法篩選陽性克隆的原理. 30
3樓：匿名使用者
藍白斑篩選是bai
重組子篩選的一種du方法： 是根zhi據載體的遺傳特徵篩dao選重組子，如α回-互補、抗生素基因等。現答在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的dna的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacz）的調控序列和前146個氨基酸的編碼資訊。
在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（mcs），它並不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用於可編碼β-半乳糖苷酶c端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。這樣，lacz基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。
由α-互補而產生的lacz+細菌在誘導劑iptg的作用下，在生色底物x-gal存在時產生藍色菌落，因而易於識別。然而，當外源dna插入到質粒的多克隆位點後，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。
如用藍白斑篩選則經連線產物轉化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養12-16hr後，有重組質粒的細菌形成白色菌落。
有沒有高人能告訴我藍白斑篩的步驟，原理。謝謝。 有加分
4樓：只為不再錯過
在這之前先說一下做藍白斑篩選必備條件
（1）首先定義
lacz：b(beta,打不出來，下同)-半乳糖苷酶
lacz'：含有b-半乳糖苷酶的啟動子和5‘端的編碼的a肽鏈。
那麼lacz'是沒有功能的（是指能表達沒有功能的蛋白質），只有和失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶重新互補形成完整的b-半乳糖苷酶後才具有功能，它能將底物xgal（5-溴-4-氯-3吲哚-b-半乳糖苷）水解，形成一種藍色化合物，菌落呈藍色；其靠近5‘端有多克隆位點，當插入外源目的基因後將會影響該基因的功能，導致無法形成完整功能的b-半乳糖苷酶而不能水解iptg底物，菌落呈白色。
通俗易懂的說法就是lacz'是左半邊，失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶是右半邊，組合在一塊形成有功能的酶。
（2）明白以上這點，我們再往下說。
1.一般來說，做藍白斑，質粒載體上有lacz'
2.lac i，是lacz'的抑制基因，表達的阻遏蛋白和lacz'上的操作子區結合將會阻遏lacz'基因的表達，當有誘導物，iptg（異丙基-b-d-硫代半乳糖苷）與阻遏蛋白結合後，將使阻遏蛋白脫離操作子，從而使lacz'正常表達。
3.抗藥基因，如amp，用於篩除未將載體轉入了的宿主細胞，這是前提，否則鑑定是沒有意義的
4.而宿主應該具備的條件是具有失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶的一種突變體，即前文說的右半邊
（3）步驟如下：
1.將目的基因插入lacz'靠近5‘端有多克隆位點，是否成功插入有待藍白斑篩選鑑定。
2.通過一定的方法，如cacl2誘導法將目的基因轉入宿主菌（失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶的一種突變體）
3.將宿主菌至於含有iptg，xgal，以及抗生素amp固體培養基中培養
4.形成白色菌斑，說明目的基因插入了多克隆位點，導致lacz’的基因功能受到影響，與失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶組合後不能水解xgal，菌落呈白色。形成藍色菌斑，說明目的基因沒有成功插入多克隆位點，lacz'功能正常，與失去正常氨基端（5'端）的b-半乳糖苷酶組合後能水解xgal，生成藍色化合物，菌斑呈藍色。
5.這裡不存在由於質粒未能成功轉入宿主而導致的xgal不水解形成白色菌落的可能，因為未能成功匯入質粒的宿主菌將會因為缺乏amp抗性而被殺死。
抗性基因插入失活的篩選原理
α互補篩選的原理是什麼？
5樓：***
載體帶有一個大腸桿菌的dna的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacz）的調控序列和前146個氨基酸的編碼資訊。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（mcs），它並不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用於可編碼β-半乳糖苷酶c端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。
這樣，lacz基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。由α-互補而產生的lacz+細菌在誘導劑iptg的作用下，在生色底物x-gal存在時產生藍色菌落，因而易於識別。然而，當外源dna插入到質粒的多克隆位點後，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。
這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。如用藍白斑篩選則經連線產物轉化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養12-16hr後，有重組質粒的細菌形成白色菌落。
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