1樓:匿名使用者
核酸(核酸)遺傳資訊的載體,是基因表達的物質基礎。它是否是一個核酸的結構或功能,首先需要進行分離和純化的核酸。核酸樣品的質量將是直接關係到的成功或失敗的實驗。
核酸的分離,提純原則:1。維護的核酸分子的結構完整性。
因為所有的遺傳資訊被儲存在主結構的結構的核酸 - 水平也確定的高層次結構和其他生物大分子的組合的形式。控制的ph範圍內(ph值= 5-9)的分離的核酸的原則:1)在溫度不太高,2),3),以保持一定的離子強度; 4)減少的機械剪下力的物理因素核酸
a>在核酸的分離和提取,最重要的是,以防止生物降解的核酸在細胞或外來核酸酶能夠消化的核酸鏈的一級結構中的磷酸二酯鍵,損壞核酸。儀器和試劑需要高溫殺菌,需加核酸酶抑制劑的提取緩衝液。的
常用的dna抑制劑具有的金屬離子螯合劑,如edta-na2(乙二胺四乙酸二鈉),8 - 羥基喹啉。陰離子型表面活性劑如sds,試劑新增的核酸內切酶的抑制,可以使蛋白質變性,並結合到帶負電荷的複合物,在高鹽溶液中沉澱的配合物與變性的蛋白質。抑制劑的
常用核糖核酸酶(rna酶):帶負電荷的膨潤土粘土(膨潤土)的作用機制:膨潤土,可吸附核糖核酸酶失活。
depc(富馬酸二甲酯,碳酸二乙酯)(c2h5ocoocooc2h5)粘稠液體,有強烈的核酸酶抑制劑。其作用機制:蛋白質變性,蛋白his組合。
你想幫助的答案。
2樓:匿名使用者
理論知識在講核酸章節的書裡就有。具體操作基本上都是分子生物學的基本方法。雖然是學這個的,「範疇」這個詞不知道你想具體知道什麼呢。。。
在實驗室核酸提取分離是最基本的遺傳物質或基因組研究實驗。相對的還有蛋白質方向的,蛋白質研究的基礎也是蛋白的分離,提取,鑑定。額,學業不精,答案對付看吧~
3樓:匿名使用者
dna重組,pcr技術,質粒的提取,酶切,分子標誌和基因克隆都有涉及核酸的提取。
4樓:匿名使用者
重組dna,pcr技術,提取質粒,消化,分子標記和克隆參與在提取核酸。
分子生物學的研究範圍有哪些
臨床分子生物學檢驗
5樓:楊風遊
核酸分離與純化
核酸分離提取的原則
1、選擇原則,一是保證提取核酸一級結構的完整性,二是儘量排除其他分子的汙染
2、保持核酸結構的完整性,應儘量減少破壞核酸的有害因素,儘量簡化操作步驟。
技術路線的設計
1、核酸的釋放,有物理法和化學法,化學法又分為溶胞法(應用最多最廣泛)與乾燥法
2、核酸的分離純化,須去除三方面的雜質:非核酸大分子物質,不需要的核酸分子,分離純化過程中新加入的有機溶劑和金屬離子等。
3、核酸的濃縮、沉澱和洗滌
濃縮:若溶液中dna含量低且容積較大,不易進行乙醇沉澱時,可用固體聚乙二醇吸水濃縮法或丁醇抽提濃縮法濃縮dna。
沉澱與洗滌:有機溶液沉澱核酸主要是利用核酸可與納鉀等陽離子形成鹽,遮蔽了帶負電的磷酸基團,使核酸分子聚集在一起而不溶於有機溶劑;鹽類可使核酸沉澱,但往往含有少量共沉澱的鹽,此時可經70-75%的乙醇洗滌而除去。
核酸的鑑定
首先是含量的鑑定
1、紫外分光光度法:核酸分子中的鹼基對波長260nm的紫外光有強烈吸收作用(最大吸收峰),1微克dna鈉鹽的吸光度之為0.02,也就是a260=1時雙鏈dna含量為50μg/ml,單鏈dna/rna含量為40μg/ml,單鏈寡核苷酸的含量為33μg/ml。
適用於濃度大於0.25μg/ml的核酸溶液。
2、熒光光度法,以熒光染料嵌入鹼基平面,則核酸在紫外線的激發下發出熒光,且熒光強度積分與核酸含量成正比,有三個特點:靈敏度高;受rna,ssdna和其他物質的干擾小;對分子生物學中的常用酶無抑制作用。
其次是純度鑑定
1、紫外分光光度法:最常用,核酸在260nm處有最大吸收峰,蛋白質則在280nm處;鹽和小分子在230nm處,酚在270nm處,這個差別可區分到底是什麼汙染;
純dna的a260/a280=1.8,若高出說明rna汙染,若低於則說明殘餘蛋白質;
a260/a280=2.0為高質量rna的標誌(1.8-2.1都可以) a230/a260=0.4-0.5,若升高則說明有殘餘鹽。
2、熒光光度法
利用熒光染料溴化乙錠嵌入鹼基平面後,核酸在紫外線的激發下發出橙紅色熒光,作為熒光染料示蹤。可鑑定dna製品有無rna干擾,反之亦可。
rna變性電泳後有特徵性的三條帶,原核生物為23s、16s、5s的rrna條帶,真核生物則由28s、18s的rrna和5s、5.8s的rrna和trna;(mrna代表基因轉錄水平,行使模版功能)
還有完整鑑定性:
以溴化乙錠為示蹤染料的核酸瓊脂糖凝膠電泳結果可用於判斷核酸完整性
1、完整無降解或降解很少的總rna電泳圖,除具特徵性三條帶外,三條帶的熒光強度應為一特定比值
2、降解係數大的核酸條帶相對分子質量大,電泳遷移率低,溴化乙錠嵌入核酸中的數量也增多,熒光強度高;反之~
3、一般28s或23srna的熒光強度約為18s或16s的2倍,否則提示有rna降解,若在加樣槽附近有條帶,則dna有汙染。
儲存:dna:原則是減少dna脫氨基,抑制dna酶、減少dna分子的各種反應、避免微生物汙染
一般將dna儲存於ph8.0的te緩衝溶液中,可減少dna脫氨/抑制dna酶,加少量氯仿可抑制細菌汙染;在零下70度可儲存5年+
rna:主要是抑制rna酶
以焦炭酸二乙酯水溶解rna,或在rna溶液中加入rnasin(rna酶阻抑蛋白)等rna酶抑制劑,可延長儲存時間;另外將rna以沉澱形式儲存於70%乙醇溶液或去離子甲醯胺溶液中,可於零下20度長期儲存。
關於在血站裡使用的核酸提取儀是不是大部分是用磁珠法提取,而不是用離心柱法提取的問題
6樓:無語翹楚
是的,離心柱法不能使用核酸自動提取儀。
磁珠能在微觀介面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。利用氧化矽奈米微球的超順磁性,在chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,能從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中的dna和rna分離出來,可應用在臨床疾病診斷、輸血安全、法醫學鑑定、環境微生物檢測、食品安全檢測、分子生物學研究等多種領域。
7樓:鄭州鑫亞廣告
是的,離心柱法不能使用核酸自動提取儀!磁珠法提取試劑盒一大優點就是可以配合核酸自動提取儀,實現自動化提取,一次可以提取96個樣,大大的節約了時間,很方便的!產品特點:
1,簡單快速丨丨不需要多次離心,較短時間即可獲得較純的核酸。
2,安全無毒丨丨在整個過程中不涉及氯仿、酚等有毒試劑。
3,靈敏度高,耗材少丨丨用於珍惜材料、痕量核算的提取。
4,提取的核酸純度高丨丨可直接用於酶切、pcr、分子雜交等各種分子生物學實驗。
5,適用範圍廣,無特殊要求。丨丨可用於普通認為較難提取甚至無法提取核酸的檢驗。
求英文版分子生物學實驗講義
8樓:懶三
我有核酸的分離提取的,一會給發過去.你注意查收.別的沒有.
分子生物學是指什麼?
9樓:廣西師範大學出版社
分子生物學是指在分子水平上研究生命現象的科學,從生物大分子(核酸、蛋白質)的結構、功能和生物合成等方面來闡明各種生命現象的本質。研究內容包括各種生命過程,如光合作用、發育的分子機制、神經活動的機理、癌的發生等。
生物大分子,特別是蛋白質和核酸結構功能的研究,是分子生物學的基礎。現代化學和物理學理論、技術和方法的應用推動了生物大分子結構功能的研究,分子生物學和生物化學及生物物理學關係十分密切,它們之間的主要區別在於:
(1)生物化學和生物物理學是用化學的和物理學的方法研究在分子水平,細胞水平,整體水平乃至群體水平等不同層次上的生物學問題。而分子生物學則著重在分子(包括多分子體系)水平上研究生命活動的普遍規律;
(2)在分子水平上,分子生物學著重研究的是大分子,主要是蛋白質,核酸,脂質體系以及部分多糖及其複合體系。而一些小分子物質在生物體內的轉化則屬生物化學的範圍;
(3)分子生物學研究的主要目的是在分子水平上闡明整個生物界所共同具有的基本特徵,即生命現象的本質;而研究某一特定生物體或某一種生物體內的某一特定器官的物理、化學現象或變化,則屬於生物物理學或生物化學的範疇。
生物化學與分子生物學最常用的實驗技術包括什麼
10樓:匿名使用者
分子生物學實驗技術,是進行分子生物學理論和應用研究的技術,主要有核酸分離內純化或合成、核苷容酸順序測定、分子雜交和dna人工重組技術。核心是dna人工重組技術—核酸分離純化或合成、核苷酸順序測定和分子雜交技術都服務於dna重組技術。
11樓:匿名使用者
分子抄細胞生物學研究所用的實驗襲技術有哪些分子診斷學的研究範疇包括:利用遺傳學、病理學、免疫學、生物化學、基因組學、蛋白質組學和分子生物學的理論和方法**疾病發生和發展的分子機制。為整個疾病過程尋求特異的分子診斷指標,以及利用分子生物學技術為這些分子診斷指標建立臨床實用的檢測方法。
細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長,在培養的過程中細胞不再形成組織(動物)。
培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中,由於環境的改變,細胞的移動或受一些其他因素的影響,培養時間加長,傳代導致細胞出現單一化型。
有什麼分子生物學實驗技術的書介紹
12樓:紫光
《分子生物學實驗技術》
本書是關於分子生物學實驗技術的一部綜合性著作。它全面覆蓋了有關分子生物學實驗技術的諸多領域,包含了生物大分子製備和分析常用技術、蛋白質與核酸的提取與分離、pcr技術、分子雜交與印跡技術、分子克隆技術、外源基因轉移技術、蛋白質表達技術、分子標記技術、分子改造技術、測序及人工合成技術、基因組學技術、蛋白質組學技術、生物晶片技術、生物資訊學技術、rna研究技術等。
常用的分子生物學技術包括哪些分子生物學技術都包括哪些技術
分子生物學技術 pcr 分子克隆 核酸 電泳 瓊脂糖凝膠電泳測序 dna,rna 提取 轉化外源dna 體外轉錄 逆轉錄 cdna文庫構建 原位雜交 酵母雙雜交 差減雜交 扣除雜交 藍白斑篩選 抗生素篩選 基因工程技術大部分都是依據分子生物學原理設計出來的。分子生物學的基本含義 分子生物學是從分子水...
分子生物學大家怎麼複習
關於複習方bai 法,這裡給du 你一些思路 1 章zhi 節複習,不管是那門dao學科都分為大的版章節和小的權課時,一般當講完一個章節的所有課時就會把整個章節串起來在系統的講一遍,作為複習,我們同樣可以這麼做,因為既然是一個章節的知識,所有的課時之前一定有關聯,因此我們可以找出它們的共同之處,採用...
pcr技術在分子生物學中有哪些應用
幾種重要的pcr衍生技 術 一 逆轉錄 pcr技術 逆轉錄pcr reverse transcription pcr,rt pcr 是將rna的逆轉錄反版應和pcr反應聯合應用權的一種技術。rt pcr是目前從組織或細胞中獲得目的基因以及對已知序列的rna進行定性及半定量分析的最有效方法。二 原位 ...