有哪些條件可影響PCR反應

2025-01-31 21:55:17 字數 1950 閱讀 5849

1樓:網友

溫度、ph、酶活性和用量、原料濃度。

影響pcr反應效率的因素有哪些

2樓:厙淑蘭封嬋

模板純度,有較多蛋白或其他雜質時,會一定程度影響pcr效率;

模板量,過高的模板量反而會降低pcr效率和特異性。

引物。引物的長度需要再效率和特異性間獲得優化,其次要控制引物gc含量;

聚合酶,要考慮酶的保真率和速度;

mg離子濃度,mg離子濃度過高會降低特異性,濃度過低會降低效率;

退火溫度。退火溫度低,效率會高,但特異性降低;退火溫度高,效率降低,但特異性會提高;需優化。

影響pcr反應的因素有哪些?

3樓:蓋宜淳于碧巧

4.變性在高濃度產物條件下,產物解鏈不完全,以及最終產物的阻化作用(焦磷酸化,雙鏈dna)

pcr的反應體系要具有以下條件:

4樓:閒風自適

pcr的反應體系櫻做要具有以下條件:

a.被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的dna引物。

c.作做祥為模板的目的dna序列。

d.具有熱穩定性的dna聚合酶。

正脊胡衡確答案:abcd

pcr反應需要哪些物質?

5樓:浪尖討生活

參加pcr反應的物質主要有五種即:引物、酶、dntp、模板和緩衝液。

1、引物有多種設計方法,由pcr在實驗中的目的決定,悉畢但基本原則相同。pcr所用的酶主要有兩種**:taq和pfu,分別來自兩種不同的噬熱菌。

其中taq擴增效做判率高但易發生錯配。pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據需要必須做不同的選擇。

2、酶一般是dna水解酶和dna聚合酶,dna水解酶用於切斷磷酸二酯鍵的酶,這些酶使糖磷酸酯主鏈上的磷酸二酯鍵水解。

3、模板即擴增用的dna,可以是任何**,但有兩個原則,第一純度必須較高,第二濃度不能太高以免抑制。

4、在pcr反應中,使用低dntp濃度,可減少非靶位置啟動和延伸時的核苷酸錯誤摻入。一般可根據靶序列的長度和組成來決定最低dntp濃度。例如在100μl的反應體系中,4種dntp的濃度為20μmol/l,可基本滿足合成 dna或10pmol/l的400bp序列。

5、緩衝液的成分最為複雜,除水外一般包括四個有效成分:緩衝體系,一般使用hepes或mops緩衝體系;一價陽離子,一般採用鉀離子,但在特殊情況下也可使用銨根離子;二價陽離子,即鎂離子,根據反應體系確定,除特殊情況外不需調整。

影響pcr反應效率的因素有哪些?如何有效地提高pcr反應的效率?

6樓:閉曄旅爾容

一、溫度迴圈引數。

二、引物引物設計。

三、dna聚合酶。

四、mg2+

影響pcr反應效率的因素有哪些?如何有效地提高pcr反應的效率

7樓:g年輪

模板純來度,有較多蛋白或其自他雜質時,會一bai定程度影響pcr效率;

模板量du,過高zhi的模板量反而會降低pcr效率和特異性;

引物,引物的長度需要再效率和特異性間獲得優化,其次要控制引物gc含量;

聚合酶,要考慮酶的保真率和速度;

mg離子濃度,mg離子濃度過高會降低特異性,濃度過低會降低效dao率;

退火溫度:退火溫度低,效率會高,但特異性降低;退火溫度高,效率降低,但特異性會提高;需優化。

pcr的反應條件是什麼

8樓:網友

taq酶的最適溫度,目標序列的長度,還有退火溫度。

9樓:天堂之淚泉

pcr反應條件為溫度、時間和迴圈次數。

簡述建立pcr反應體系時需注意哪些問題

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影響城市發展的因素多種多樣 受地形因素影響,城市多分布在農業基礎好 交通便利 土壤肥沃 人口密集的平原地區,而高原和山區城市較少。受氣候因素影響,城市多分布在氣候適宜的中緯度沿海平原地區,而溼熱的熱帶雨林地區 乾旱的沙漠地區 寒冷的高山 高原 高緯度地區城市極少。受河流因素影響,城市多分布在地勢平坦...

影響酶活性的條件有哪些,影響酶活性的因素

凡能影響蛋白質的理化因素都能影響酶的活性。因此溫度 酸鹼度 重金屬離子都能影響酶的活性。高溫 強酸 強鹼等因素均可引起酶喪失催化能力。1 酶的濃度 越高,活力越大2 底物濃度 越大,結合的酶越多3 溫度專 37 活力最好4 ph 酶需要ph多數在屬7.4左右活力最大,少數酶在酸性或鹼性溶液活力最高如...