1樓：從桂花穰凰
pcr時，將rna反轉錄成cdna反應體系怎麼算
再以cdna為模板進行pcr擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。rt-pcr使rna檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量rna樣品分析成為可能。該技術主要用於：
分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cdna探針、構建rna高效轉錄系統。
rt-pcr即逆轉錄pcr，是將rna的逆轉錄（rt）和cdna的聚合酶鏈式擴增反應（pcr）相結合的技術。rt-pcr技術靈敏而且用途廣泛，可用於檢測細胞/組織中基因表達水平，細胞中rna病毒的含量和直接克隆特定基因的cdna序列等。
2樓：富淑琴殷月
標準的pcr反應體系：10×擴增緩衝液
10ul
4種dntp混合物
各200umol/l
引物各10～100pmol
模板dna
0.2ug
taqdna聚合酶
2.5u
mg2+
1.5mmol/l
加雙或三蒸水至
100ul
pcr反應五要素：參加pcr反應的物質主要有五種即引物、酶、dntp、模板和mg2+
引物：引物是pcr特異性反應的關鍵,pcr產物的特異性取決於引物與模板dna互補的程度.理論上,只要知道任何一段模板dna序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用pcr就可將模板dna在體外大量擴增.
設計引物應遵循以下原則：①引物長度：15-30bp,常用為20bp左右.
②引物擴增跨度：以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段.③引物鹼基：
g+c含量以40-60%為宜,g+c太少擴增效果不佳,g+c過多易出現非特異條帶.atgc最好隨機分佈,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列.④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3』端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶.
⑤引物3』端的鹼基,特別是最末及倒數第二個鹼基,應嚴格要求配對,以避免因末端鹼基不配對而導致pcr失敗.⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處.⑦引物的特異性：
引物應與核酸序列資料庫的其它序列無明顯同源性
希望有所幫助
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