1樓:義翹神州加油
原因有很多可能:
質粒上的目的基因被宿主系統破壞;版
目的基因對應蛋白對細胞有毒害權作用,被細胞反饋調節到抑制表達;
目的基因表達與細胞本身特點能力不符;
質粒載體選擇與表達系統不合適;
檢測方法有問題,有表達,但是沒有檢測出來;......
2樓:牧銳衡同方
博凌科為解答:copy個人感覺bai不能憑沒有條帶就斷du定細胞沒有表達蛋
白,因為zhi跨膜蛋白本身就dao
是比較難提取的蛋白,再加上你的抗體不一定起作用,這些都要考慮進去的吧。建議先檢測或細胞有沒有表達你要的蛋白,就在轉染後48h加入一抗(適用於facs那種的抗體),然後再加入帶熒游標記的二抗;如果你能買到直接帶熒游標記的一抗也非常好。先檢測活細胞是否表達了你的蛋白。
然後再做決定。
質粒轉染細胞不表達的問題~
3樓:佰草集
不知道bai
你沒雜出條帶du是因為什麼原因,還有
zhi你雜交的抗體是dao目的蛋白的抗體嗎回?你雜雜標籤蛋白試試答,看看有沒有條帶啊?我這麼說是因為,膜蛋白確實不好提取,而且提取後可能空間構想改變了,你的抗體可能識別不了了,而標籤蛋白是多肽,構象不會受影響,只要不被你的目的蛋白檔上就行,所以你可以用標籤蛋白的抗體雜交下,試試。
一般最好把標籤和目的蛋白融合表達一下
4樓:k紅蓮騎士
你好,我現在也遇到同樣的問題。請問你的問題最後是怎麼解決的?
一個質粒轉染後為什麼表達兩條蛋白帶
5樓:匿名使用者
轉染(transfection):指真核細胞由於外源dna摻入而獲得新的遺傳標誌的過程.常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類.
轉染目的:研究你的目的片段到細胞內的表達.
轉染一般是將目的基因構建到某個載體,將構建好的重組質粒匯入細胞中,這樣就能表達你所要的目的蛋白用於後續實驗.
質粒轉染細胞後是整合到基因組中還是遊離存在
6樓:匿名使用者
這要看你用的是哪一種質粒載體內,有些質粒就在細胞中進行容表達,不整合入基因組中,比如腺病毒類的表達載體;有些質粒上有整合的序列,可以整合到細胞基因組上進行表達。
一般的表達質粒上後面有自帶的polya序列,所以產生的mrna是帶polya尾巴的。
一個質粒轉染後為什麼表達兩條蛋白帶
7樓:匿名使用者
轉染(transfection):指真核細胞由於外源dna摻入而獲得新的遺傳標誌的過程.常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染(永久轉染)兩大類.
轉染目的:研究你的目的片段到細胞內的表達.
轉染一般是將目的基因構建到某個載體,將構建好的重組質粒匯入細胞中,這樣就能表達你所要的目的蛋白用於後續實驗.需要根據具體情況進行具體分析,推薦從以下角度進行分析: 對細胞表達目的蛋白的時間進行梯度設計,分別取樣然後做sds-page\wb分析; 參考實驗室經驗資料; 嘗試採用磁珠ip試劑盒產品(義翹有相關產品)進行小量樣品的快速純化;
病毒為什麼要包裝後才能轉染細胞
8樓:阿魯巴星人
包裝病毒轉染細胞是為了提高轉染效率。
你拿包裝病毒的質粒去轉染細胞,和轉染普通質粒的效率沒什麼區別。
質粒轉染細胞多長時間提取蛋白
9樓:義翹神州加油
需要根據具體情況進行具體分析,推薦從以下角度進行分析:
對細胞表達目的蛋白的時間進行梯度設計,分別取樣然後做sds-page\wb分析;
參考實驗室經驗資料;
嘗試採用磁珠ip試劑盒產品(義翹有相關產品)進行小量樣品的快速純化;...
觀察黑藻細胞質流動的標誌為什麼是葉綠體不能是液泡嗎大大的
王老師給您解釋這個問題 這道題主要涉及到必修一細胞結構 不能用大液泡 雖然大。但其不動，無法看到細胞質流動過成 葉綠體則可以。液泡不會隨著細胞質流，而葉綠體則會隨著細胞質的流動而流動。為你解答 不能，觀察黑藻細胞質流動是我們選取的參照物應該是大而靜止的，液泡是流動的所以不行。祝學習順利，謝謝 生物問...
求助 為什麼在細菌或真核生物中會存在質粒，它和擬核的關係是什
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一種是脂質體轉染後,單克隆篩選穩定細胞株。另外一種是應用逆轉錄病毒,慢病毒轉染,篩選穩定細胞株。pf用帶目標基因的質粒 pegfp n1 轉染hepg2細胞,用g418篩選穩定表達株10天,gfp表達減弱減少。只要沒有整合到基因組dna,轉染進入的外源性dna都會隨著細胞 而被稀釋。所以經過10天后...