1樓：
擬南芥作為模式植物在生物學研究中有著十分重要的作用和極大的優勢。本文以columbia野生型擬南芥為材料,用酶解法對擬南芥葉肉進行原生質體分離,用peg介導的轉化法將外源基因轉化到原生質體中進行瞬時表達。文章著重分析了影響擬南芥葉肉原生質體分離和轉化的因素,最終確定了原生質體的最優分離條件,建立了以擬南芥葉肉原生質體為基礎的瞬時表達體系。
主要實驗結果如下: 1.擬南芥葉肉原生質體分離的最優酶液組成及濃度。
用纖維素酶r-10、半纖維素酶、果膠酶、離析酶r-10、崩潰酶的不同酶類組合對擬南芥葉肉進行原生質體分離,結果發現,在cpw鹽溶液中附加1.5%纖維素酶r-10及0.5%離析酶r-10時,分離效率最高,原生質體個數達到9.
55×10~6/gfw,此時細胞碎片數量也最少。 2.最佳酶解條件。
分別對酶解時間、酶液ph等因素進行分析。結果發現,酶ph為6.0,28℃黑暗條件酶解4h時,原生質體產量和活力最高(產量:
11.42×10~6個/gfw,活力:90.
2%)。 3.原生質體穩定性與活力測定。
選擇甘露醇做為滲透壓調節劑使原生質體細胞保持完態,用fda染色法檢測原生質體活力。結果發現,擬南芥葉肉原生質體在0.4m甘露醇的滲透壓環境中可以保持完態,此時破碎的細胞最少,原生質體活力最高,達到90.
1%。 4.瞬時表達體系的建立。
選擇內質網膜內嵌蛋白sip及肌動蛋白相關蛋白arp6進行研究。通過rt-pcr擴增得到sip(720bp)基因及arp6(1200bp)基因,再將它們分別構建到瞬時表達載體pa7-yfp上,用peg法將其轉化入擬南芥葉肉原生質體進行表達。分析了peg濃度,質粒dna含量,原生質體個數等因素對轉化的影響。
結果發現,轉化效率在一定範圍內隨peg濃度及質粒dna含量的升高而升高,當轉化體系中peg濃度為20%,質粒dna含量為20μg,原生質體細胞數為2.5×10~4個時轉化效率最高(69.37%)。
2樓：臺融封含景
一般我們沒做過，你可以去找老師
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