1樓：匿名使用者
應該從以下幾個方面考慮：
可能是目的基因沒有整合到32a中；
版可能權是pcr模板量不足；
可能是挑取的菌落為假陽性；
可能是pcr反應條件不合適。
還有的時候出現的極端的原因，是細菌就是無法整合這個基因，所以無論如何都無法得到陽性結果，我就遇到過這種情況。
這類實驗經常有這種問題，最有效的方法就是從頭開始重新做，因為可能出問題的地方比較多，而我們又沒有時間逐個去分析。
2樓：匿名使用者
質粒裡連東西了麼？ 可能沒連進去 質粒自連了唄 或者質粒酶切的時候沒有切開
3樓：匿名使用者
質粒有沒有做酶切驗證？
質粒圖譜怎麼看
4樓：匿名使用者
第一步：首先看ori的位置，瞭解質粒的型別（原核/真核/穿梭質粒）
ori的箭頭指複製方向，其他元件標註的箭頭多指轉錄方向（正向）。
第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什麼篩選標記：
（1）ampr：水解β-內醯胺環，解除氨苄的毒性。
（2）tetr ：可以阻止四環素進入細胞。
（3）camr：生成氯黴素羥乙醯基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr）：氨基糖苷磷酸轉移酶，使g418（卡那黴素衍生物）失活。
（5）hygr：使潮黴素β失活。
第三步：看多克隆位點（mcs）。它具有多個限制酶的單一切點，便於外源基因的插入。
如果在這些位點外有外源基因的插入，會導致某種標誌基因的失活，而便於篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源dna插入片段大小。質粒一般只能容納小於10kb的外源dn**段。一般來說，外源dn**段越長，越難插入，越不穩定，轉化效率越低。
第五步：是否含有表達系統元件，即啟動子－核糖體結合位點－克隆位點－轉錄終止訊號。這是用來區別克隆載體與表達載體。
克隆載體中加入一些與表達調控有關的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗目的為準繩。
關於表達質粒轉化bl21(de3)的問題
5樓：匿名使用者
轉化成功的e.coli細胞會帶有kana抗性，不怕kana，沒轉化成功的無法在含有kana的瓊脂板子上生長。不需要藍白斑，就挑取能在上面生長的菌落就可以了，那些都是已經成功轉化、帶有質粒的菌。
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