1樓：小獅子
沒關係的，清洗乾淨就可以了，感受態細胞就是處理過的用來擴增dna的普通細胞，在手上也不會有什麼傷害，不用擔心
感受態細胞的製備時有什麼注意事項
2樓：天寂無痕
1、培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一
個非常理想方法。
2、在儲存感受態時，dmso 要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。
3、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然後儲存於超低溫冰箱內。
4、凍存的感受態用一次拿一管，不要反覆凍融。化凍之後立即使用，不要冰上放太久。
5、操作時可以輕彈輕甩，儘量避免用移液器吹吸。
3樓：y神級第六人
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
感受態細胞為什麼要放倒-80度儲存
4樓：匿名使用者
康體生命的感受態細胞都是-80度儲存的，dh5α，dh10β，stbl3，jm109，bl21(de3)，top10這些都是包乾冰、包運送的，平均下來一支只要3.5
感受態細胞加入培養基以後搖菌為什麼出現沉澱
5樓：匿名使用者
隨著時間的延bai長，培養液內的細du菌會越來zhi越多，隨著營養物質的dao減少和細菌代謝產物專的增多，培養液會
屬變得越來越不適宜細菌繁殖，此時會有一些細菌死亡，死亡的細菌會沉在底部。此外，細菌的某些代謝產物，也可能與培養基的成分發生反應產生沉澱，一些無動力的細菌也會沉澱在底部。
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化方法
6樓：匿名使用者
原因：目的基因匯入植物細胞時，由於沒有經過鈣離子處理沒有變成感受態細胞，細胞的通透性小，目的基因難以進入細胞。
感受態細胞主要原理：
1、通過處理使細胞的通透性變大。
2、使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。
3、由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。
擴充套件資料：
氯化鈣法：
1、將快速生長的大腸桿菌置於經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞。
2、此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，並隨機出現許多間隙，外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達，實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3、將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
7樓：無語翹楚
感受態細胞（competent cell）：理化方法誘導細胞，使其處於最適攝取和容納外來dna的生理狀態。
主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。
1. 將快速生長的大腸桿菌置於經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹；
ca離子會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞細胞膜通透性發生變化，極易與外源dna相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣複合物。
聯合其它的二價金屬離子（如mn、co）、dmso或還原劑等物質處理，可使轉化率提高100～1000倍。
2. 將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，並隨機出現許多間隙，外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達，實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3.將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
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總之ca離子使dna沉澱於細胞表面（類似真核轉染的磷酸鈣共沉澱），0-42℃的熱衝擊使得膜表面出現裂痕（很快會被自動修復-疏水作用）使得膜表面dna被攝入。
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大腸桿菌是格蘭陰性，細胞壁就是肽聚糖+外膜（脂蛋白、脂質雙層、脂多糖）
這種細胞壁結構除了作為內毒素使機體發熱、白細胞增加之外（當然還可以為此細菌形態、耐藥性、結合mg2+維持離子平衡），與細胞膜出現裂痕吸收dna並沒有什麼關係。
8樓：匿名使用者
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化只是使得細菌處於敏感狀態，並沒有涉及到基因的轉移。
9樓：為水情狂
先要改變細胞膜的通透性 才能使物質進入
感受態細胞轉化時，熱擊後需冷卻5分鐘的原因或者好處是什麼及原理？
10樓：阿魯巴星人
化轉時，感受態細胞膜由於吸附陽離子（ca2+等）呈液晶狀態，受到熱激後，細胞膜出現裂隙，外源dna進入細胞，此時細胞非常脆弱，將其冰浴冷卻，細胞膜修復閉合，進行下一步的復甦時細胞存活率將提高。
感受態轉化，什麼叫感受態細胞？什麼叫轉化
最近我bai們也在作感受態細胞轉du化 做轉化時zhi 一定要注意用冷的氯化鈣，dao還可以在加入回後42度熱休克90秒，這樣效答 果比較好。篩選時我們用的質粒中有氨卞黴素的抗性，所以只是在培養基中加入氨卞黴素就成了。但是藍白篩選不是白色的是轉入質粒的麼？籃斑是沒轉入的啊。www.biooo.com...
製作感受態細胞時寅要加抗生素嗎,製作感受態細胞時搖菌要加抗生素嗎
pmd18t連一段多長的dna,連線dna用量及時間?轉化到哪個感受態細胞中?amp抗性平板長菌情況如何?仔專細觀察以上問題,屬考慮是否轉化不成功。培養基的體積是否小於試管體積的1 5?搖菌轉數是否達到250rpm,試管要斜放?是否觀察過菌體生長過程 2 6小時生長情況 是否有噬菌體汙染?如果轉化成...
在大腸桿菌感受態細胞的製備及轉化實驗中
兩個目的 1熱激後的大腸桿菌細胞比較脆弱,培養可以恢復細胞的活性 2進一步培養,提高菌液中大腸桿菌的濃度。為什麼大腸桿菌感受態細胞製備和轉化 轉化實驗用bai液態的lb是為了讓細du胞恢復培 zhi養,也有人稱 之為讓其孵育,質dao粒或其他經專在液態lb中恢復屬培養後再塗布平板 固態培養基 是為了...