1樓：v永遠拼搏
有可能是引物特異性不好或者細菌細胞雜質所帶來的假陽性～得到的條帶有可能是混合的～建議測序分析模板用提取的核酸做模板……若還是不對 請重新設計引物 或採用巢式pcr
[菌液pcr，測序，dna提取，求助]菌液pcr的時候能p出目的條帶，為什麼測序卻完全不正確？
2樓：匿名使用者
菌落pcr的假陽性高很可能是因為你做pcr的迴圈數過大，我們實驗室一般對於高拷貝數的質粒，迴圈數不會超過25個，一般用25個。我知道一家做這些，[威斯騰生物]。感覺還可以
3樓：阿魯巴星人
菌液pcr經常會出現假陽性，最好以測序結果為準（測序引物啥的別弄錯哈~）。
4樓：匿名使用者
菌液pcr假陽性高，應該以測序結果為準
菌液pcr檢測目的條帶很明顯但是有弱雜帶是怎麼回事
5樓：匿名使用者
簡單來說bai是非特異性擴增，一個pcr反反du應體系的zhi
是有限的，大多數引物用dao於擴增目的回基因，匹配度高答
，容易結合，因此擴增快，條帶也就亮。而非特異擴增，匹配度不高，給合不穩定，因此擴出來的非特異帶顯得弱，而且通過有多條弱帶產生。
6樓：匿名使用者
非單克隆 或者引物可以從載體上p出部分片段
7樓：匿名使用者
建議：迴圈次數減少3，mg離子濃度降低到1.2mm，提高annealing的溫度
菌液pcr的假陽性是什麼原因造成的
8樓：南京金益柏
引物設計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行 pcr 擴增時，擴增出的 pcr 產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現假陽性。
需重新設計引物。
靶序列或擴增產物的交叉汙染：這種汙染有兩種原因：一是整個基因組或大片段的交叉汙染，導致假陽性。
這種假陽性可用以下方法解決：操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質外，所有試劑或器材均應高壓消毒。
所用離心管及樣進槍頭等均應一次性使用。必要時，在加標本前，反應管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸汙染，這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。
可互相拼接，與引物互補後，可擴增出 pcr 產物，而導致假陽性的產生，可用巢式 pcr 方法來減輕或消除。
求助菌液pcr跑了好幾次都是陽性，測序卻沒有訊號
9樓：南京金益柏生物科技****
可能你的菌液不是單克隆，還有可能你的目的片段有重複序列，形成髮夾結構。
菌落pcr有目的條帶與菌液pcr卻什麼都沒有
10樓：南京金益柏生物科技****
很正常,常見的原因是轉化後塗板,轉化用的連線產物種有大量基因片段。
11樓：匿名使用者
目的基因有沒有連線到載體上?有沒有經過測序驗證?
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