如何確定某種因子在訊號傳導通路的上游或下游

1樓：蘋果魅力

鈣離子導致p38mapk的增高，如果某種損傷可以通過鈣離子導致p38mapk的增高，那麼你就建立起了一個損傷模型。這時，對p38做個rna干擾，使其表達下降，再來損傷刺激，如果這時損傷刺激不會導致損傷，那麼可以說p38mapk的增高會導致損傷。

這裡最好不要用p38的抑制劑sb來處理，因為這個抑制劑是針對p38活性的抑制劑，抑制的是p38的磷酸化，而不是表達量。

如果說明的問題是p38磷酸化水平增加而導致損傷，那麼我建議用抑制劑。這時還可以用dominant-negative。抑制劑的實驗證實該藥物不影響p38表達，而影響其活化。

（應該首先考慮選用抑制劑，因為目前一些藥物的作用機制不是抑制靶點的表達，而是抑制靶點的啟用。如果在此應用rnai的話，很可能會漏掉這個機制或增加實驗步驟。）

其次，要證明你的藥物存在保護作用。

當然就是用你的藥物先處理一下，再來損傷刺激，如果這時損傷刺激不會導致損傷，那麼可以說你的藥物存在保護作用。

再次，證明你的藥物可以抑制p38表達。

用你的藥物先處理一下，再來損傷刺激，再檢測p38表達，如果用藥組相對於沒有用藥組p38表達下降，那麼可以說你的藥物可以抑制p38表達。

2樓：匿名使用者

將兩種因子a和b分別做基因沉默，沉默a gene 看看a和b表達的情況，然後沉默b gene 再看看a和b表達的情況。上游的因子被沉默表達後，下游的因子肯定表達下調或不表達。而下游因子被沉默表達後，上游因子的表達不會受影響。

還可以做個免疫共沉澱，看看上游因子是不是直接結合（作用）於下游因子的基因啟動子區，開啟下游表達。如若不是，可能另有其他的環節在中間過程。

3樓：故事還長

如何研究訊號傳導通路？請問研究某種受體或蛋白的下游訊號傳導通路，實驗設計的一般方法，都有哪些？謝謝

4樓：匿名使用者

在kegg或biocarta這些pathway資料庫裡找bai

到你感興趣du的通路zhi

，在pathway圖上找dao到你感興趣的蛋白後就能確認它的下游。版實驗方法大權體上就是上調（瞬時表達、mimics）或下調（knockout、rnai）你的gene of interest，再檢測下游的蛋白髮生了上調還是下調，看看你的goi和它們什麼聯絡。

5樓：一直嚮往安靜

查外文文獻啦。。。

一堆一堆的。