1樓：匿名使用者
逆轉錄pcr是一條rna鏈被逆轉錄成為互補dna，再以此為模板通過pcr進行dna擴增；而即時pcr是一種在dna擴增反應中，以螢光化學物質測每次聚合酶鏈式反應迴圈後產物總量的方法。通過內參或者外參法對樣品中的特定dna序列進行定量分析的方法。pcr檢測根據所使用的標記物不同可分為螢光探針bioghc elitefast sybr kit和螢光染料bioghsc super probe kit
qpcr反轉錄與普通反轉錄的區別
2樓：祿綠
二者系統組成不同 螢光定量pcr儀比普通的pcr儀多了螢光訊號採集系統和計算機分析處理系統。
所謂即時螢光定量pcr
技術，是指在pcr反應體系中加入螢光基團，利用螢光訊號積累即時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線。
對未知模板進行「定量分析」的方法。記住，即時螢光定量是定量分析。
二者系統組成不同，螢光定量pcr儀比普通的pcr儀多了螢光訊號採集系統和計算機分析處理系統。二者原理不同，螢光定量pcr即時監測與dna結合的螢光染料。
激發的螢光，普通ocr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量。
二者反應要求不同，螢光定量pcr對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通pcr可以擴增長點的片段。<>
二者應用不同，螢光定量pcr主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的，普通的pcr儀是做定性分析和擴增基因片段，定量pcr儀可以做普通pcr儀的工作，反之不行。
二者測量成本不同，定量pcr儀**較為昂貴，普通的基因擴增儀（pcr儀）只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是**要低很多，而且執行成本也要低很多。
即時螢光定量pcr技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的侷限，實現了每一輪迴圈均檢測一次螢光訊號的強度，並記錄在電腦軟體之中，通過對每個樣品ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。
反轉錄pcr的操作
3樓：秒懂百科
逆轉錄pcr：聚合酶鏈式反應的一種廣泛應用的變形。
逆轉錄pcr的實驗步驟用到哪些試劑和儀器
4樓：南京金益柏生物科技****
一、實驗器具與材料：
1、移液器：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl
2、吸頭：1ml、200μl、20μl
3、勻漿管：5ml
4、吸頭臺：放置1ml吸頭的乙個，放置20μl吸頭的乙個。
5、ep管：
6、試劑瓶：2個60ml的棕色試劑瓶（廣口，帶蓋）；1個125ml的白色試劑瓶（放無水乙醇）
7、量筒：50ml、250ml、500ml
8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml
9、試管架：5ml、
10、鹽水瓶：250ml、500ml各2個備用，乙個裝無水乙醇，另乙個裝depc水。
11、鋁製飯盒：4個。
12、塑料小飯盒：1個。
13、大瓷缸：2個。
14、錫泊紙：一卷。
15、捲紙：2卷。
16、三角燒瓶：帶蓋，稍大。
二、實驗器具的處理與準備。
1、塑料製品：（包括槍頭、ep管、勻漿管等）
先將depc水從容量瓶中倒入瓷缸中，將塑料製品逐個浸泡其中，其中小槍頭需要吸管打入depc水，過夜，然後高壓，再烤乾備用，實驗前將槍頭等放入吸頭臺，再高壓一次（ep管）
2、玻璃製品：泡酸過夜，沖洗乾淨，蒙錫紙烤乾備用（depc水泡）（洗淨後先泡1‰depc過夜，再烤乾）
3、勻漿器：（包括剪刀、鑷子）先洗淨後，再高壓（不需要泡depc）
三、試劑配製：
1、depc水：吸出1ml放在1000ml雙蒸水中配成1‰depc水，放在1000ml容量瓶中靜置4小時備用。
乙醇：用無水乙醇 depc水配，然後放-20℃儲存（其中depc水需先高壓）
3、異丙醇：放入棕色瓶中。
4、氯仿：放入棕色瓶中。
5、瓊脂糖。
5樓：匿名使用者
引物可以使用oligo(dt)18 (50μm)或random hexamers (50ng/μl)。2、模板如使用poly（a）＋rna，用量一般在10pg-500ng之間。3、biog rt mix含有優化的dntps和緩衝液，biog rtase mix 含有biog super reverse transcriptase 和rnase inhibitor 4、用於pcr反應的cdna產物體積一般不要超過pcr反應體積的1/10。
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