通用引物為啥會有引物特異性問題?
1樓:優秀如你
通用引物為啥會有引物特異性問題的原因:
引物設計要在基因序列的保守區域內。保守區域就是生物體進化過程中基本保持不變的 dna 分子中的乙個核苷酸片段或者蛋白質中的氨基酸片段,可以通族擾汪過比對不同物種間相似序列得到。這樣不管你李大是做全新的基因,還是設計多個物種的通用引物,都可以在一定程度上保證引物的可用性。
引物長度一般在20個鹼基左右。引物長度過長,則會導致延伸溫度過高,不利於taq酶反應;如果過短,則會導致引物特異性太差,出現非特異性擴增,甚至發生誤把別的基因片段檢成目的片段的情況。
gc含量在40-60%左右。gc含量過低,引物的tm值就會跟著低,退火溫度低了就不利於pcr的特異性反應;gc含量兆仔過高則會導致解鏈難度增大,可能會出現因模板解鏈不充分導致的非特異性擴增。
2樓:巧希榮委媼
已細菌為例,通用引物就是對所有種類的細菌都通用,即用通用引物可以pcr擴增所有缺祥細告扮虧菌的某段dna,特異襪神性引物只能用於某種或某類細菌dna的pcr擴增。
什麼叫通用引物,都有哪些?
3樓:清寧時光
通用引物。一般是指某基因外圍保守序列。雖然這稿掘唯個基因可能是序列多變的,(如同功酶),但兩側翼序列則是保守的。利用倆側翼保守序列設計出來的引物,稱為通用引散弊物。
有m13、t7、t3、鍵培sp6
引物的作用標準答案
4樓:無聊熱阿
引物的意義在於提供3』-oh,用於子鏈延伸,只要保證引物的3』-oh及該末端一段序列可以和模板鏈鹼基互補配對,子鏈延伸便可以完成;
一般情況下,子鏈延伸中,只要時間足夠、原料充足,最終會延伸至模板鏈的末端,子鏈延伸不會中途停止(當目的片段較大時可能會造成不能完整擴增);
pcr的最終產物,雖然有大小不同的片段存在,但完整目的基因佔絕對優勢,可通過電泳後分離獲得。
基因工程中,選用兩種不同的限制性核酸內切酶(限制酶)分別對目的基因和載體進行處理,使得二者末端分別帶上不同的粘性末端,該過程的目的,一來是為了避免目的基因和載體的自身環化,二來是保證目的基因與載體連線方向的正確性(目的基因的定向連線)。
5樓:匿名使用者
已細菌為例,通用引物就是對所有種類的細菌都通用,即用通用引物可以pcr擴增所有細菌的某段dna,特異性引物只能用於某種或某類細菌dna的pcr擴增。
引物的型別
6樓:臺湛雋
存在有自然中生物的dna複製引物(rna引物)和聚合酶鏈式反應(pcr)中人工合成的引物(通常為。
dna引物)。一般所說引物,指dna引物,以下簡稱引物。
關於引物設計原則,兩種引物可以互補
7樓:潛覓蕭俊傑
a、兩種引物之間不能有互補性,否則引物之間會配對形成雙鏈dna,a正確;
b、每種引物自身不應存在互補性,b正確;
c、只要設計出目的基因的引物,接下來即可自動進行,而不必知道其全部序列,c錯誤;
d、引物的長度關係到pcr的特異性,d正確.故選:c.
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