Sevag試劑怎麼除蛋白?

2025-02-15 08:15:27 字數 1217 閱讀 3520

1樓:大大的

常用的去除多糖中蛋白質的方法有:sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸。

法,這些方法的原理是使多糖不沉澱而使蛋白質沉澱,其中sevag方法脫蛋白效果較好,它是用氯仿。

戊醇或丁醇,以4:1比例混合,加到樣品中振搖,使樣品中的蛋白質變性。

成不溶狀態,用離心法除去。

1)sevage 法:利用蛋白質在三氯乙烷等有機溶劑中變性的特點,將提取液與 sevage試劑[氯仿:正丁醇。

5:1(v/v)]5:1 混合,振盪,離心,變性後的蛋白質介於提取液與 sevage 試劑交界處。此法的優點是條件溫和,不會引起多糖的變性。

2)三氯醋酸法。於樣品液中加入適量的三氯醋酸,混勻後靜置過夜,離心過濾棄去濾渣,收集濾液,測定糖濃度和蛋白質濃度"。

2樓:子怡軒墨

sevag 法是去除遊離蛋白的有效方法,在粗多糖溶液中加入氯仿—正丁醇混合溶液進行充分振搖,將遊離蛋白變性成為不溶性物質,經離心分離去除,可達到去除的目的。可以按下述操作試一試:

1.取粗多糖溶液4 ml ,氯仿—正丁醇(預先配製成體積比為4∶1 混合液) 溶液1 ml ,置於具塞試管中,充分振搖30 min 後,經離心機離心1 min ,然後將水相與氯仿相分開。

2.將水相再加入相當於其體積1/ 4 的氯仿—正丁醇溶液,重複上述過程,共計重複三次。多糖溶液體積較大時也可以採用分液漏斗,人工進行劇烈振盪後直接分離,注意振盪強度與分離效率關係很大。

操作過程中蛋白質多出現在兩相介面處。

sevag 法較為溫和,對多糖的結構影響不大,但效率較低,往往重複五次以上才能達到理想效果。考慮較為劇烈但效率更高的三氯乙酸法除蛋白。

3樓:網友

具體方法為:

1)常用的去除多糖中蛋白質的方法有:sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,這些方法的原理是使多糖不沉澱而使蛋白質沉澱,其中sevag方法脫蛋白效果較好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以4:

1比例混合,加到樣品中振搖,使樣品中的蛋白質變性成不溶狀態,用離心法除去。

2)sevage 法:利用蛋白質在三氯乙烷等有機溶劑中變性的特點,將提取液與 sevage試劑[氯仿:正丁醇=5:

1(v/v)]5:1 混合,振盪,離心,變性後的蛋白質介於提取液與 sevage 試劑交界處。此法的優點是條件溫和,不會引起多糖的變性。

2)三氯醋酸法 於樣品液中加入適量的三氯醋酸,混勻後靜置過夜,離心過濾棄去濾渣,收集濾液,測定糖濃度和蛋白質濃度"

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