1樓:匿名使用者
因題幹條件不完整,缺少文字,不能正常作答。
做組織免疫熒光需不需要染細胞核
2樓:
如果你對這個答案有什麼疑問,請追問,
另外如果你覺得我的回答對你有所幫助,請千萬別忘記採納喲!
免疫熒光染受體為什麼染到了細胞核上
3樓:匿名使用者
細胞膜和細胞漿表達,如果實現免疫熒光染色,能不能雙染要看具體的目的如果是 co-localization 證明兩種蛋白在同一個細胞中表達是可以雙染的
如果想進一步呈現兩種蛋白在一個細胞中不同的亞細胞分佈定位,這個取決於兩個因素,第一是蛋白本身的表達是否有明顯的亞細胞定位特徵。第二需要高解析度的顯微鏡,能有助於區別兩種蛋白在一個細胞中不同的亞細胞定位
所以細胞膜和細胞漿表達,如果實現免疫熒光染色,能不能雙染要看具體的目的
作免疫熒光雙染難嗎
4樓:南京金益柏生物科技****
這個是重疊的。
perk一抗用的是兔,二抗是568抗兔抗原;gfap一抗是小鼠,二抗是488抗小鼠。血內清都用了donkey。
**當容
中perk跟gfap出來的一模一樣,所以我懷疑倆**出來的是不是都是gfap一種蛋白呢?實在太一樣了。不能確定perk有沒有染出來。
我也做過perk & ox-6 和perk & neun的熒光雙染,樣像都跟這些**一樣,兩種蛋白拍的**一模一樣,所以我懷疑是perk的問題。
做免疫熒光怎麼看蛋白是在細胞核表達還是胞漿表達
5樓:南京金益柏生物科技****
復染細胞核,常規用過的是dapi進行細胞核覆染(藍色)。目的是為了鑑別目的蛋白的位置是胞核表達,還是胞質表達或胞膜表達。
一般來講,如果是胞核表達,會和藍色的細胞核顏色重疊;胞質或胞膜表達則不會重合,單獨看目的蛋白的表達,會看到有個黑色的空洞的,尤其細胞影象更為明顯。
從樓主的**看,貌似是在胞核表達(因為紅色和綠色都很弱,在胞質沒有看到,相反卻和胞核重合了)
染色質量需要進一步提高。
6樓:匿名使用者
免疫組化和免疫熒光都是蛋白定位的檢測(也就是確定蛋白是表達在細胞核/漿/膜)。
免疫組織化學又稱免疫細胞化學,是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來,藉助顯微鏡的現像和放大作用,在細胞,亞細胞水平檢測各種抗原物質,並可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學技術現已有:
免疫熒光組織(細胞)化學技術、免疫酶組織(細胞)化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免疫熒光組織(細胞)化學技術是採用熒光素標記的已知抗體(或抗原)作為探針,檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原(或抗體),形成的抗原抗體複合物上帶有熒光素,在熒光顯微鏡下,由於受高壓汞燈光源的紫外光照射,熒光素髮出明亮的熒光,這樣就可以分辨出抗原(或抗體)的所在位置及其性質,並可利用熒光定量技術計算抗原的含量。以達到對抗原物質定位、定性、定量測定的目的。
做免疫熒光如何看蛋白是在細胞核表達還是胞漿表達
7樓:南京金益柏生物科技****
復染細胞核,常規用過的是dapi進行細胞核覆染(藍色)。目的是為了鑑別目的蛋白的位置是胞核表達,還是胞質表達或胞膜表達。
一般來講,如果是胞核表達,會和藍色的細胞核顏色重疊;胞質或胞膜表達則不會重合,單獨看目的蛋白的表達,會看到有個黑色的空洞的,尤其細胞影象更為明顯。
從樓主的**看,貌似是在胞核表達(因為紅色和綠色都很弱,在胞質沒有看到,相反卻和胞核重合了)
染色質量需要進一步提高。
8樓:9孩兒咳嗽
[3] 未拍劇目編輯
核定位的蛋白做免疫熒光需要dapi染色麼
9樓:義翹神州加油
需要,輔助確定細胞核位置。義翹典型結果如下,可以作為參考。
10樓:路戍人
1.實驗原理
免疫染色的實驗原理類似於western blotting,兩者都是運用抗體的特異性識別作用來顯示目的蛋白,但是由於免疫染色需要在原位進行,而且蛋白沒有經過富集,因此其實驗難度較高。
實驗的基本原理是:利用固定劑(通常是甲醛或多聚甲醛)將細胞固定,使得細胞膜的通透性大大增加,並且利用triton-x-100使得一部分膜蛋白變性,從而使通透性進一步加強。利用正常羊血清封閉,可以令許多蛋白先與血清內的非特異性抗體結合,而特異性的抗體由於動力學的關係可以通過競爭性的反應與目的蛋白結合,這一過程可以保證抗體識別的特異性。
二抗可以特異性識別一抗的fc區域,利用二抗連線不同的熒光基團,就可以在熒光顯微鏡下觀察到不同的熒光,從而顯示目的基因的表達情況。
另外,免疫熒光實驗由於其較高的敏感性可以顯示出基因表達的亞細胞情況(核內,核外,膜上以及一些較大的細胞器上),所以通常被用來作為基因定位的方法。
dapi的中文名稱是4,6-聯脒-2-苯基吲哚,是一種常用的熒光染料,其作用機理與溴化乙錠(eb)等染色劑的機理類似:它們與dna雙螺旋的凹槽部分可以發生相互作用,從而與dna的雙鏈緊密結合。結合後產生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm,正好uv(紫外光)的激發波長是356nm,使得dapi成為了一種常用的熒光檢測訊號。
jagielski m. et. al在2023年首次運用該技術檢測細胞培養中的支原體感染。
後來隨著技術的進步,該技術被運用於各種微生物的檢測、生長監測,胚胎髮育過程的檢測,細胞週期的檢測和各種核定位的實驗。
做免疫熒光出現了細胞核外的非特異性染色,是怎麼回事
11樓:治敬雜旁
如果你的**和操作過程都是一樣,而一組沒訊號、另一組卻有訊號,那出現差異的原因就應該是一抗的反應過程(不知你的顯色過程是怎樣的);而你要是能確定看到的結果不是基因表達的實際情況,即你所說的非特異染色,那就應該是抗體的原因,單就非特異染色而言,可能是你的抗體稀釋度不夠,可以嘗試倍增稀釋比,最好是查詢使用與你用相同抗體的相關文獻的稀釋比,或直接諮詢公司的技術支援;另外一個原因可能是你的抗體不好使,由於你的另一組抗體沒有提供陽性訊號,致使你的體系沒有可靠的對照,建議你選擇一個陽性對照,比如腫瘤中常用的ki67,這樣可以知道你的操作步驟是否存在問題。
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