關於石蠟切片免疫熒光如何消除自發熒光

2021-03-03 21:30:07 字數 2386 閱讀 4896

1樓:南京金益柏生物科技****

可以用遠紅外波長的熒光範圍內的二抗,在此範圍內基本看不到自發熒光的訊號;也可以用丙酮固定不用醛類物質。都可以減少自發熒光的產生

石蠟切片的免疫熒光可以對蛋白進行定量嗎

2樓:南京金益柏生物科技****

包埋好的復標本用切片

制機切石蠟切片(5微米),並將蠟片貼附於多聚賴氨酸處理過的載玻片上。

經60°C烘片2-8小時(都試過,沒啥差別,但非實質性器官應適當延長時間)。

二甲苯i脫蠟30分鐘(若要保證脫蠟完全可將其加熱至40-60°C),二甲苯ii脫蠟10分鐘。

3樓:愛派尚飾品旗

勸集會遊行桌諦香菇忻

石蠟切片免疫熒光與免疫組化一抗濃度有區別嗎

4樓:北京索萊寶科技****

免疫熒光的一抗濃度一般高於免疫組化的一抗濃度,但是也要看具體情況:

因此免疫熒光一般採取二步法,而免疫組化中有biotin放大這一步。所以建議免疫熒光的時候重新摸索濃度,要是採用三步法可能不需要摸索了。另我們免疫熒光抗體一般用推薦濃度。

免疫熒光抗體濃度要根據免疫組化結果的強弱調整,如果較強,用相同濃度即可;如果組化陽性較弱,那麼做熒光時要加大抗體濃度。至於免疫組化的抗體是否能做免疫熒光,其實是由組織型別及標本的固定方式決定的。一般組化為石蠟切片,熒光為冰凍切片或細胞爬片。

如果組化和熒光用的是相同的標本,那麼抗體就能通用,畢竟組化和熒光的區別在於一抗的呈現方式,而非抗原抗體的結合。

石蠟切片能不能做免疫熒光

5樓:南京金益柏生物科技****

免疫熒光當然冰bai凍切片較好,du但石蠟切片同樣zhi可以做出來dao的。冰凍切片不需要固定,從版

而有效保護了抗原權的活性,如果是石蠟切片,可能損失了許多抗原,儘管有抗原修復,抗原修復主要機制是將因甲醛作用而導致的抗原活性封閉重新啟用,所以還是有影響,但一般來說應該可以通過這一步有效恢復,標本固定時間比較重要,時間越長,抗原修復時間和溫度都要增加。

其次是抗體的問題,可能要摸索一下濃度。

冰凍切片的缺點就是結構破壞厲害。而石蠟切片形態結構保持較好,因為有效的固定很重要。

如果有冰凍切片機,可以試一下冰凍切片,可能效果會理想一些的。

略知一些而已。

請教:肺組織石蠟切片的免疫熒光結果失敗原因

6樓:南京金益柏生物科技****

你這個可能原因有:

1 抗體濃度太大引起非特異著色----解決辦法:降低抗體濃度,可以先在組化上摸一下濃度(主要是一抗)。

2 **時間太長-----解決辦法:縮短**時間,我們一般ms範圍,dapi,200倍下我們是60ms左右(熒光顯微鏡,其他儀器時間不論)

3 蠟引起的背景----解決辦法:徹底脫蠟,每缸時間都要延長。

7樓:匿名使用者

幾點建議,希望有用:

1. dapi濃度降低,或時間縮短,或拍攝時注意調整,太強了。

2. 不知道有沒有摸索抗體的濃度和到底好不好用。取組織(包括陽性對照和肺組織)根據抗體說明書,摸合適濃度,另加上陰性對照(不加一抗)。

不怕麻煩的話還是建議做組化,先不做熒光,當然組化的呈色掌握不好的話,直接熒光也可以,也省得後期再調整濃度。

石蠟切片的自發熒光也是比較重的。但是感覺你的主要問題還在於抗體濃度和孵育時間沒有摸索好,包括dapi的孵育時間,一般3min就足夠了!

能夠做組織免疫熒光的抗體可以做細胞免疫熒光嗎 5

8樓:艾康生物

你好!你用的是單抗嗎?如果是單抗,他們會有說明書說上面是可適用的實驗範圍,那個是給他們驗證過的。

如果沒有,你也可以自己嘗試用一下,說不定可以用。但是也有可能結果要麼是不理想,要麼是沒結果。這個要看運氣了。

做實驗本身就有運氣成分在裡面的。

人體組織切片三色免疫熒光怎麼做

9樓:南京金益柏生物科技****

抗體的**除了mouse和rb都是可以的

比如goat

只要不和之前用的一抗和二抗有重合都可以

顏色可以選擇cy5

tunel 和免疫熒光雙色可以在一起做

但是要把配色的方案設計好

通常免疫熒光的顏色多為紅、藍、綠、黃,也有些其他的顏色但不是很常用。我個人建議加藍色熒光。

你可以重新調整每個抗體的顯色顏色,根據你選擇的凋亡抗體決定了。

凋亡抗體可選豬抗、羊抗等都可以,就是種屬差異了,前提是有的賣啊,不行就調整其他抗體為羊抗。

總之,儘量滿足三色吧,如果買不到相應的抗體,就分開做了。

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