1樓:匿名使用者
度都差不多
tm是當50%的引物和互補序列表現為雙鏈dna分子時的溫度。tm對於設定pcr退火溫度是必需的。
tm可採用下列公式計算:tm=2(a+t) + 4(g+c)。
sybr green pcr溶解曲線有何意義
2樓:壞蛋老公他媳婦
作用類似於電泳,但是相對於電泳更靈敏,更清晰一些。
通過溶解曲線可
以瞭解目的產物tm值,是否出現雜峰。一般溶解曲線的結果+電泳的結果和在一起相對比較準確。當然最後片段也可以測序最終確定目的產物。
主要的是:根據溶解曲線可以確定以下幾點:
a.擴增產物是否單一,即是否含有引物二聚體等其它非目的性產物。如果在90度左右的時候溶解曲線陡然下降,說明產物較純。
b.可以確定產物的tm值,一般在90度以上。
可能用途更多,最常用的主要的兩點就是這兩個了。
針對溶解曲線還有一條相應的曲線,看起來更方便一些。
dna溶解曲線表示擴增產物的特異性。
曲線橫座標是溫度,每個溫度點一個。一般從60到98度縱座標是熒光強度的變化值(不是強度本身)。一開始加熱的時候,雖然熒光強度比較強,但是由於雙鏈沒有解離,所以熒光強度保持不變。
當加熱接近於pcr產物tm時,雙鏈開始解離,熒光強度變小,機器會比較前後2個溫度點的熒光強度,然後把2者的差值標在圖上。tm到達時,有一般雙鏈解離,這時的熒光強度變化最大(峰值)。再加熱,雙鏈全部解離,所以熒光強度的變化又變小了。
pcr產物大小不一,但是只要有相同或者相近的tm,峰值就有可能在一個位置上。如果實際測得的峰值和理論計算的吻合,問題不大。如果有差別,說明有非特異性產物,不要再用sybr green方法。
怎麼理解"溶解度曲線下面的面積上的點,表示溶液所處的狀態是不飽和狀態」,曲線下面的點縱座標也是溶解
3樓:匿名使用者
首先copy你要理解什麼是溶解bai度曲線,要了解什麼是溶解du度
定義:溶解度是指在zhi一定的溫度下,某物質在100克溶dao劑(通常是水)裡達到飽和狀態時所溶解的克數。(這裡注意100克只是溶劑,而不是溶質和溶劑相加,舉例來說,某物質的溶解度在某溫度下為30克,那就是說在該溫度下,把30克該物資溶解在100克水中,那麼得到的是飽和溶液)
其次,看一個曲線,你要看它的橫座標和縱座標各是什麼意思,記住這個對你以後看圖會有很大幫助
在溶解度曲線上,橫座標代表溫度,縱座標代表克數,曲線上任意一點都表示相應的溫度下,100克水中溶解多少克溶質為飽和。
所以說曲線下面的點,都是相應溫度下,該點對應的克數的溶質溶解於100克水中的不飽和溶劑,而你要依照這個點來配置溶劑就要計算出你需要的比例
而上面的點依其資料配製的溶液則為: 對應溫度時的飽和溶液,且溶質有剩餘。
熒光定量pcr溶解曲線為什麼會有急劇的上升連著急劇下降
隨著溫度升高，當溫度達到tm值時候，dna就會變性分成單鏈的，此時熒光染料不內能結合nda所以檢測 容的熒光型號越來越弱。你說的出現的峰是熒光性號對溫度求導後得到的曲線圖，出現峰是因為在接近tm值的位置熒光性號下降的斜率很快導致在對溫度求導後出現峰。出現單峰說明沒有非特異性的結合和引物二聚體的產生。...
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