熒光定量pcr需要跑到平臺期才為準確嗎

1樓:匿名使用者

不是的,只要擴增到儀器能夠檢測到熒光強度的迴圈數,即一個ct值就可以。通過比對不同樣品的ct值,即可換算出模板中某個基因的強度。

熒光定量pcr中關於閾值的設定是否會影響ct值?

2樓:匿名使用者

閾值和基線的設定肯定會影響ct值,你可以採用每次反應完後軟體自己選定的閾值。你也可以手動調整,但是如果你是相同的模板,做不同反應,那你必須使兩次實驗的閾值和基線調到相同。使用相同的標準品,才能減小不同批次反應的誤差。

3樓:

閾值和基線的設定是會影響ct值的,一般儀器會自動對基線和閾值進行優化,一般選用儀器上的設定就可以了。

但有些時候也需要調整,主要根據標準曲線上的斜率,擴增效率和r2值進行調整,將斜率調到合適的位置即可。

當然也可以在每次進行實驗時設定1-2個內參,根據內參調整引數。

實時熒光定量pcr的原理

4樓:匿名使用者

熒光定量pcr原理:隨著pcr反應的進行,pcr反應產物不斷累計,熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈,收集一個熒光強度訊號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。

熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針(bioghc elitefast sybr kit)和熒光染料(bioghsc super probe kit)

5樓:匿名使用者

所謂的實時熒光定量 pcr 就是通過對 pcr 擴增反應中每一個迴圈產物熒光訊號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。其原理是在實時熒光定量 pcr 反應中,引入了一種熒光化學物質,隨著

pcr 反應的進行, pcr 反應產物不斷累計,熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈,收集一個熒光強度訊號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。

實時定量pcr,定義

6樓:匿名使用者

就是能夠定量分析樣品中核算濃度的pcr方法

定量pcr的擴增曲線的平臺期為什麼是鋸齒狀

7樓:匿名使用者

1、反應體系隨著pcr的進行,造成阻礙物增多,到平臺期時達到最高水平,影響機器的正常檢出;需要優化反應體系各個離子的含量

2、機器本身不穩定造成的影響,不過這種情況很少發生

定量pcr的擴增曲線的平臺期為什麼是鋸齒狀

8樓:匿名使用者

很有可能你這個所謂的平臺期不是真的平臺期,而是非特異性的背景噪音,訊號非常弱。放大以後就會是這樣了。