1樓：匿名使用者
隨著溫度升高，當溫度達到tm值時候，dna就會變性分成單鏈的，此時熒光染料不內能結合nda所以檢測
容的熒光型號越來越弱。
你說的出現的峰是熒光性號對溫度求導後得到的曲線圖，出現峰是因為在接近tm值的位置熒光性號下降的斜率很快導致在對溫度求導後出現峰。
出現單峰說明沒有非特異性的結合和引物二聚體的產生。
2樓：匿名使用者
去看數學公式，反正我是不懂數學的
熒光定量pcr擴增曲線，開始有個下降的曲線
3樓：匿名使用者
從你這個圖上看，這是非特異性的擴增。訊號非常弱，而且都超過40個迴圈還沒有訊號。
之所以前面有下降，其實都是背景噪音訊號。你看縱座標的數值都非常的小。所以不是真正的擴增訊號，都是背景噪音干擾而已。沒有任何擴增產物。
熒光染料定量pcr熔解曲線tm值過高對結果有什麼影響
4樓：誰說我不好哎
用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber green分子結合的pcr產物
隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
5樓：匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。
接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
6樓：匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
定量pcr熔解曲線為何不止一個主峰？
7樓：匿名使用者
博凌科為-為你解bai答：
du1．引物設計不夠優化zhi。應避免引物二dao聚體和髮夾結構的出現版。2.
引物濃度不佳。適當權降低引物的濃度，並注意上下游引物的濃度配比。3.
鎂離子濃度過高。適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。4.
模板有基因組的汙染。rna提取過程中避免dna的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。
8樓：匿名使用者
最主要的原因：
1.有非特異性產物
2. 有引物2聚體。
建議你重新設計引物。而且目前sybr green的方法已經逐漸被淘汰了，最好改用probe-primer 的方法來做。
熒光定量pcr熔解曲線
9樓：匿名使用者
溶解曲線是在正常的pcr反應基礎上加一個溶解曲線的反應條件，其中當溫度由60℃升至95℃時，pcr儀每隔一定的溫度檢測一次訊號。最後將收集的訊號繪製出溶解曲線，然後將溶解曲線一次微分就會得到我們平時看到的峰性圖。每一條線代表著某個孔裡的反應體系裡產物的單一情況，某一條線如果為單峰且在一定合理的溫度範圍內（一般為80~90℃）則認為正常，如果為雙峰則可能有非特異性擴增。
由此可以判斷產物是否為目的基因且是否單一。內參有內參的線，目的基因有目的基因的線，同一條線不會出現兩個基因的峰。你可以看一下溶解曲線的橫、縱座標。
10樓：烏冬蛋白
內參量多，迴圈數少吧，我也不熟
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
11樓：匿名使用者
這個用於syber green實時pcr。而使用探針的不需要。
因為syber green是非特異性結合，所以如果有非特異性的序列被擴增，也會同樣產生訊號。在設計引物的時候，可以計算出被擴增序列的tm。pcr反應完成以後，開始進行解離曲線的測量。
一般是對反應產物逐步加溫，每增加一度，測訊號一次。pcr產物會在溫度達到tm時發生解離，熒光訊號會一下子消失、如果把溫度和熒光訊號的變化做一個圖，就會看到一開始，熒光訊號沒有變化，是一個平直的線。達到tm附近是，會有一個比較銳利的峰，說明訊號的變化很大，繼續加熱超過tm，這是雙鏈都開啟了。
所以訊號也不會再有變化，所以又是平直的線。
如果產物都是特異性的，就是我上面說的那樣。如果有非特異性產物，就會出現不在tm就出現峰值，或者有矮而胖的峰值等等異常情況出現，這樣，那個管子的樣本就不能用了。
熒光定量pcr結果溶解曲線有雙峰，結果可用嗎
12樓：匿名使用者
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！ 如果絕對定量，需要進一步實驗吧！
熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼原因
最常見的是樣本的擴增效率很差,所以到了平臺期也不是很強,這樣基線就相對很高了。熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼原因 探針濃度過高 體系中有熒光物質汙染 擴增效率低 我師兄用biog熒光定量pcr試劑盒擴增效果特別好,曲線非常典型,反應速度也很快,沒有遇到這個問題 熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼...
請問我這個實時熒光定量PCR融解曲線為什麼是從負值開始的？結果可用嗎
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你提供的檔案非常好,只是沒有涉及雙內參的問題,我的實驗用了兩個內參基因,現在問題是不知道怎麼處理這樣的資料。謝謝你的回答 樓主,我現在也遇到這樣的問題了,能不能把你最後怎樣處理雙內參的方法告訴我,萬謝了 實時熒光定量pcr內參是什麼東西 1 實時熒光定量pcr內參 在不同的pcr反應管中已定量的內參...