1樓：分子達人
看這個結果有幾個猜想：
1)如果之前做實驗的時候，儀器沒有出現過這種情況，有可能是儀器出現錯誤，建議重啟一下，或者改軟體需要重新校準一下。
2)從這個結果來看，引物應該是可以用的，主峰也只有一個，特異性還是有的，不過還要參考一下擴增曲線，ct值如果在35個迴圈以內，應該是沒有問題的。
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
2樓：匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。
接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
3樓：匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！
因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！
請問：實時熒光定量pcr怎樣設定才能有溶解曲線？
4樓：匿名使用者
有一種可能是，在試驗開始的設定階段，需要為整個實驗設計出熔解曲線的程式，這個您可能忘記了。
5樓：匿名使用者
在設定反應程式時，在最後加一步
熒光定量pcr結果溶解曲線有雙峰，結果可用嗎
6樓：匿名使用者
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！ 如果絕對定量，需要進一步實驗吧！
實時熒光定量pcr，溶解曲線怎麼判斷是否為目的產物
7樓：南京金益柏生物科技****
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！ 如果絕對定量，需要進一步實驗吧！
8樓：為青生物
溶解曲線的單峰明顯，橫座標在80度以上，一般就是pcr產物
老師，您好，有些問題想諮詢您，我不太明白實時熒光定量pcr溶解曲線的tm值是儀器自動給出的嗎，
9樓：有能註冊的名嗎
較好的溶解曲線應該只有目的片段單一的峰，如果在目的片段靠前的位置有小峰，可能是引物二聚體汙染，為什麼你的曲線什麼峰都沒有呢？
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
10樓：匿名使用者
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。
出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
詳細請見我的回答
11樓：表詠蒿樂蓉
用syber
green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
熒光定量pcr繪製溶解曲線應該從多少度開始？
12樓：
實時pcr產物的tm值大小一般會在80°上下，所以溶解曲線不必從40°開始，可以從65°開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。
請問做實時熒光定量pcr實驗時，為什麼做標準曲線？
13樓：匿名使用者
1 做標曲才可以算出這對引物的擴增效率（其斜率），方便用pfaffl方法來進行相對定量（得到的結果相對精確一點），否則只能預設擴增效率為2，用2^-ddct(livak)法來計算
2 做標曲才可以絕對定量。
14樓：匿名使用者
標準曲線是已知量的
做了標準曲線可以實現絕對定量
15樓：匿名使用者
絕對定量和相對定量都可以做標準曲線，目的在於用已知濃度樣品的量做成的標準曲線來定未知濃度樣品的量。
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