1樓：匿名使用者
如果不購置特殊裝置，那麼cck8或mts是取代mtt的更方便的方法。
2樓：匿名使用者
當前利用流式細胞儀和染料cfse 結合來分析淋巴細胞的增殖已經被廣泛應用. 這項技術能夠實現對體外或體內8 至10 個不同細胞**週期的視覺化。這種方法的另外益處是可以通過細胞分選的辦法將所需的**不同代數的活細胞**，以便進一步研究這些細胞的功能。
相比之下可以發現，無論是mtt 比色法、3h-tdr 摻入法，還是brdu 標記法，都只能對活細胞進行檢測，忽視了某些細胞已經**又發生死亡的可能性；而使用cfse 標記，死亡的細胞將在幾天內保持熒光強度基本不變，同時可使用其它染料將其區分開來，為增殖分析提供了更加全面的資料[4] 。此外，在淋巴細胞增殖過程中，cfse 技術能夠用來監測子代細胞的積聚[5]；cfse 技術還能夠檢測免疫反應的動力學變化, 體內或體外追蹤某個亞群的細胞增殖, 對研究細胞分化所必需的標誌或與細胞**有關的細胞內蛋白具有重要意義[6]。cfse 標記技術具有操作簡單、使用方便、安全無輻射、觀察期長等諸多優點。
請問現在測細胞活性，除了mtt，還有其他好方法嗎？
3樓：匿名使用者
mtt是最常用的檢測細胞活性的方法，但目前也有很多其他選擇。像cck-8和wst-1，還有一些其他方法不是很常用。
cck-8比前面的mtt更加靈敏，也越來越受到大家的認可，cck-8的原理跟mtt其實是相同的，不同之處在於cck-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟，因此可以減少一定的誤差。對細胞毒性小；為1瓶溶液，毋需預製，即開即用。但是cck-8**要比mtt貴，我們選了一個知名度比較好的國產cck-8試劑盒，炎熙的cck-8試劑盒，已經用了一年多了，質量穩定，**比sigma的便宜很多。
沒辦法，預算有限。
還有一些檢測增殖，毒性的試劑，像brdu 等等，沒有親自用過。
mtt法比較各組用什麼檢驗方法
4樓：愛我家菜菜
檢測標準bai中都包含檢測方法du
。檢測標準就是一種zhi以檔案形式釋出的dao統一協定，其版中包含可以用來權為某一範圍內的活動及其結果制定規則、導則或特性定義的技術規範或者其他精確準則，其目的是確保檢測出的資料能夠符合需要。
檢測方法就是對特定的檢測物進行試驗，依據科學的原理，確定出的試驗內容、方式、步驟、過程、計算分析等實現需要得出的資料和結果的具體手段和辦法。
檢測標準、檢測方法都是隨著科技的不斷髮展不斷的更新，但是檢測方法有些是超前於檢測標準中所規定的，但檢測結果要符合檢測標準來判定。
mtt法操作步驟
5樓：匿名使用者
（1）單細胞懸來液接種於96孔培養
自板；103-104細胞/孔，每孔培養基總量200微升（96孔培養板每孔容積370微升），37℃、5％
co2培養箱中培養一段時間（根據實驗目的決定培養時間）（2）加入2毫克／毫升的mtt液（50微升／孔）；繼續培養3小時。
（3）吸出孔內培養液後，加入dmso液（150微升／孔），將培養板置於微孔板扳蕩器上振盪10分鐘，使結晶物溶解。
（4）酶標儀檢測各孔od值（檢測波長570奈米）。記錄結果，繪製
mtt的實驗方法
6樓：小希
⒈選擇適當的細胞接種濃度。一般情況下，96孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有
e68a8462616964757a686964616f31333361303030105個細胞。但由於不同細胞貼壁後面積差異很大，因此，在進行mtt試驗前，要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，以保證培養終止致細胞過滿。這樣，才能保證mtt結晶形成數量與細胞數呈的線性關係。
否則細胞數太多敏感性降低，太少觀察不到差異。
⒉藥物濃度的設定。一定要多看文獻，參考別人的結果再定個比較大的範圍先初篩。根據自己初篩的結果縮小濃度和時間範圍再細篩。
切記！否則，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。
⒊ 時間點的設定。在不同時間點的測定od值，輸入excel表，最後得到不同時間點的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什麼時候變得平坦了（到了平臺期）那個時間點應該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制表現的最明顯）。
⒋培養時間。200ul的培養液對於10的4～5次方的增殖期細胞來說，很難維持68h，如果營養不夠的話，細胞會由增殖期漸漸趨向g0期而趨於靜止，影響結果，我們是在48h換液的。
⒌mtt法只能測定細胞相對數和相對活力，不能測定細胞絕對數。做mtt時，儘量無菌操作，因為細菌也可以導致mtt比色od值的升高。
⒍理論未必都是對的。要根據自己的實際情況調整。
⒎實驗時應設定調零孔，對照孔，加藥孔。調零孔加培養基、mtt、二甲基亞碸。對照孔和加藥孔都要加細胞、培養液、mtt、二甲基亞碸，不同的是對照孔加溶解藥物的介質，而加藥組加入不同濃度的藥物。
⒏避免血清干擾。用含15%胎牛血清培養液培養細胞時，高的血清物質會影響試驗孔的光吸收值。由於試驗本底增加，會試驗敏感性。
因此，一般選小於10%胎牛血清的培養液進行。在呈色後，儘量吸淨培養孔內殘餘培養液。 mtt 溶液的配製方法
通常，此法中的mtt 濃度為5mg/ml。因此，可以稱取mtt 0.5克，溶於100 ml的磷酸緩衝液（pbs）或無酚紅的培養基中，用0.
22μm濾膜過濾以除去溶液裡的細菌，放4℃ 避光儲存即可。在配製和儲存的過程中，容器最好用鋁箔紙包住。
需要注意的是，mtt法只能用來檢測細胞相對數和相對活力，但不能測定細胞絕對數。在用酶標儀檢測結果的時候，為了保證實驗結果的線性，mtt 吸光度最好在0-0.7 範圍內。
mtt一般最好現用現配，過濾後4℃避光儲存兩週內有效，或配製成5mg/ml儲存在-20度長期儲存，避免反覆凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把mtt粉分裝在ep管裡，用的時候現配，直接往培養板中加，沒必要一下子配那麼多，尤其當mtt變為灰綠色時就絕對不能再用了。
mtt有致癌性，用的時候小心，有條件最好帶那種透明的簿膜手套.配成的mtt需要無菌，mtt對菌很敏感；往96孔板加時不避光也沒有關係，畢竟時間較短，或者你不放心的時候可以把操作檯上的照明燈關掉.
配製mtt時用用pbs溶解，也有人用生理鹽水配，60℃水浴助溶。
pbs配方：
nacl 8g
kcl 0.2g
na2hpo4 1.44g
kh2po4 0.24g
調ph 7.4
定容1l 1、收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入100ul，鋪板使待測細胞調密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無菌pbs填充）。
⒉、5%co2，37℃孵育，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板），加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁後即可加藥，或兩小時，或半天時間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5-7個梯度，每孔100ul，設3-5個復孔.建議設5個，否則難以反應真實情況。
⒊、5%co2，37℃孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。
4、每孔加入20ulmtt溶液（5mg/ml，即0.5%mtt），繼續培養4h。若藥物與mtt能夠反應，可先離心後棄去培養液，小心用pbs衝2-3遍後，再加入含mtt的培養液。
5、終止培養，小心吸去孔內培養液。
6、每孔加入150ul二甲基亞碸，置搖床上低速振盪10min，使結晶物臢（zā）充分溶解。在酶聯免疫檢測儀od490nm處測量各孔的吸光值。
7、同時設定調零孔（培養基、mtt、二甲基亞碸），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、mtt、二甲基亞碸）。 1、收集對數期細胞，調節細胞懸液濃度1×106/ml，按次序將①補足的1640（無血清）培養基40ul ；②加actinomycin d（有毒性）10ul用培養液稀釋 （儲存液100mg/ml，需預試尋找最佳稀釋度，1:10-1:
20）；③需檢測物10ul；④細胞懸液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（邊緣孔用無菌水填充）。每板設對照（加100ml 1640）。
2、置37℃，5%co2孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。
3、每孔加入10 ul mtt溶液（5 mg/ml，即0.5%mtt），繼續培養4 h。（懸浮細胞推薦使用wst-1，培養4 h後可跳過步驟4，直接酶聯免疫檢測儀od570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值）。
4、離心（1000轉x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亞碸，置搖床上低速振盪10 min，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀od570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值。 細胞過了30代以後就不要用了，因為狀態不好了；培養板要用好的（最好進口板），不好的板或重複利用的板只可做預實驗。
接種時最好按照預實驗摸索出的密度接種，因為細胞密度在10000/ml左右時，所測得的od值的區間即細胞抑制率（或者增值率）的所呈現的線性關係最好，結果最可信。如果鋪的太稀細胞的殺傷不會很明顯，太密細胞可能都會凋亡，因為細胞長的太快營養會不夠，最後導致死亡。且而細胞過密或者過少，增殖都會過快或者過慢，其增值率線性關係不佳。
故而mtt細胞密度多采用10000/ml，100ul/孔。
細胞密度要根據不同細胞的特點來定。如果你做的藥品對細胞具有刺激作用那麼取小點的細胞濃度，如果你做的藥品對細胞具有抑制作用那麼取大點的細胞濃度，這樣與對照的區別更明顯，資料更好。懸浮細胞每孔的細胞數可達到105，貼壁細胞可為103-104。
其它的聲音
⒈首先細胞的接種密度一定不能過大，一般每孔1000個左右就夠了，我認為寧少勿多。尤其是對於腫瘤細胞。10000/孔是太高了，這樣即使藥物有作用，mtt方法也是表現不出的，最佳點板濃度在4000-5000/孔，太少的話sd值會很大。
（對於不同的細胞，每孔細胞數要摸索一下，對照組od在1.4以下為佳，當然通常來說更不要超過2。）
⒉mtt本身就是比較粗的實驗，增殖率10%左右的波動都不算奇怪。特別是新手，20%的波動也是常見的，所以很可能是技術原因引起的，特別是種板技術一定要過關。
⒊我做的是腫瘤細胞的mtt實驗，這種細胞長的很快一開始我是用100000/ml的濃度來接種的，結果細胞長的太滿結果是沒有梯度也沒有線性關係。後來調整濃度，用過40000~80000/ml的濃度都做過mtt實驗，結果發現做的結果比較好點的是60000~70000/ml的濃度組的。用40000/m的濃度的組，由於細胞少，藥物作用的梯度還是有，只是沒有很好的線性關係。
還有根據細胞生長速度以及藥物的特性（有時間依賴性和濃度依賴性的藥物）來確定培養時間是48小時還是72小時。
注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉澱下來，導致每孔中的細胞數量不等，可以每接幾個就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，儘量避免人為誤差。雖然移液器比移液管精確得多，但是如果操作不熟，cv會在8%左右。
另外，吹散次數過多也會影響細胞活力。所以要熟練些、快些上板。
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