1樓：solarbio_晨
sds-page常見問題：
⒈ 配膠緩衝液系統對電泳的影響？
在sds－page不連續電泳中，制膠緩衝液使用的是tris－hcl緩衝系統，濃縮膠是ph6.7，分離膠ph8.9；而電泳緩衝液使用的tris－甘氨酸緩衝系統。
在濃縮膠中，其ph環境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動效率低；而cl離子卻很高，兩者之間形成導電性較低的區帶，蛋白分子就介於二者之間泳動。由於導電性與電場強度成反比，這一區帶便形成了較高的電壓梯度，壓著蛋白質分子聚集到一起，濃縮為一狹窄的區帶。當樣品進入分離膠後，由於膠中ph的增加，呈鹼性，甘氨酸大量解離，泳動速率增加，直接緊隨氯離子之後，同時由於分離膠孔徑的縮小，在電場的作用下，蛋白分子根據其固有的帶電性和分子大小進行分離。
所以，ph對整個反應體系的影響是至關重要的，實驗中在排除其他因素之後仍不能很好解決問題的情況，應首要考慮該因素，當然其他的因素也可以從多方面考慮。
⒉ 樣品如何處理？
根據樣品分離目的不同，主要有三種處理方法：還原sds處理、非還原sds處理、帶有烷基化作用的還原sds處理。
1）還原sds處理：在上樣buffer中加入sds和dtt（或β-巰基乙醇）後，蛋白質構象被解離，電荷被中和，形成sds與蛋白相結合的分子，在電泳中，只根據分子量來分離。一般電泳均按這種方式處理，樣品稀釋適當濃度，加入上樣buffer，離心，沸水煮5min，再離心加樣。
2）帶有烷基化作用的還原sds處理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的並經久牢固的保護sh基團，得到較窄的譜帶；另碘乙酸胺可捕集過量的dtt，而防止銀染時的紋理現象。100ul樣品緩衝液中10ul 20%的碘乙酸胺，並在室溫保溫30min。
3）非還原sds處理：生理體液、血清、尿素等樣品，一般只用1%sds沸水中煮3min，未加還原劑，因而蛋白摺疊未被破壞，不可作為測定分子量來使用。
⒊ sds-page電泳凝膠中各主要成分的作用？
聚丙烯醯胺的作用：丙烯醯胺與為蛋白質電泳提供載體，其凝固的好壞直接關係到電泳成功與否，與促凝劑及環境密切相關；
制膠緩衝液：濃縮膠選擇ph6.8，分離膠選擇ph8.
8，選擇tris－hcl系統，temed與ap：ap 催化劑，催化單丙和雙丙聚合成聚丙烯醯胺。temed四甲基乙二胺，催凝劑，加速ap催化作用；十二烷基硫酸鈉（sds）：
陰離子去汙劑，作用有四：去蛋白質電荷、解離蛋白質之間的氫鍵、取消蛋白分子內的疏水作用、去多肽摺疊。
⒋ 提高sds-page電泳解析度的途徑？
聚丙烯醯胺的充分聚合，可提高凝膠的解析度。建議做法：待凝膠在室溫凝固後，可在室溫下放置一段時間使用。
忌即配即用或4度冰箱放置，前者易導致凝固不充分，後者可導致sds結晶。一般凝膠可在室溫下儲存4天，sds可水解聚丙烯醯胺。
⒌「 微笑」（兩邊翹起中間凹下）形帶原因？
主要是由於凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現於較厚的凝膠中。
處理辦法：待其充分凝固再作後續實驗。
⒍ 「皺眉」（兩邊向下中間鼓起）形帶原因？
主要出現在蛋白質垂直電泳槽中，一般是兩板之間的底部間隙氣泡未排除乾淨。
處理辦法：可在兩板間加入適量緩衝液，以排除氣泡。
⒎ 為什麼帶出現拖尾現象？
主要是樣品融解效果不佳或分離膠濃度過大引起的。此外可能是灌膠時分離膠過多導致濃縮膠很少，不能起到濃縮作用，沒有把樣品壓成一條線。
處理辦法：加樣前離心；選擇適當的樣品緩衝液，加適量樣品促溶劑；電泳緩衝液時間過長，重新配製；降低凝膠濃度；灌膠時分離膠不要過多。
⒏ 為什麼帶出現紋理現象？
主要是樣品不溶性顆粒引起的。
處理辦法：加樣前離心；加適量樣品促溶劑。
⒐ 什麼是「鬼帶」，如何處理？
「鬼帶」就是在跑大分子構象複雜的蛋白質分子時，常會出現在泳道頂端（有時在濃縮膠中）的一些大分子未知條帶或加樣孔底部有沉澱，主要由於還原劑在加熱的過程中被氧化而失去活性，致使原來被解離的蛋白質分子重新摺疊結合和亞基重新締合，聚合成大分子，其分子量要比目標條帶大，有時不能進入分離膠。但它卻於目標條帶有相同的免疫學活性，在wb反應中可見其能與目標條帶對應的抗體作用。
處理辦法：在加熱煮沸後，再新增適量的dtt或beta巰基乙醇，以補充不足的還原劑；或可加適量edta來阻止還原劑的氧化。
⒑ 為什麼溴酚藍不能起到指示作用？
我們在實驗中常會遇到溴酚藍已跑出板底，但蛋白質卻還未跑下來的現象。主要與緩衝液和分離膠的濃度有關。
處理辦法：更換正確ph值的buffer；降低分離膠的濃度。
⒒ 為什麼電泳的條帶很粗？
電泳中條帶很粗是常見的事，主要是未濃縮好的原因。
處理辦法：適當增加濃縮膠的長度；保證濃縮膠貯液的ph正確(6.7）；適當降低電壓；
⒓ 為什麼電泳電壓很高而電流卻很低呢？
這種現象一般初學者易出現。比如電壓50v以上，可電流卻在5ma以下。主要是由於電泳槽沒有正確裝配，電流未形成通路。
包括：a.內外槽裝反；b.
外槽液過少；c.電泳槽底部的絕緣體未去掉（比如倒膠用的橡膠皮）。
處理辦法：電泳槽正確裝配即可。
⒔ 濃縮膠與分離膠斷裂、板間有氣泡對電泳有影響嗎？
這主要出現在初學者中，一般對電泳不會有太大的影響。前者主要原因是拔梳子用力不均勻或過猛所致；後者是由於在解除制膠的夾子後，板未壓緊而致空氣進入引起的。
⒕ 凝膠時間不對，或慢或快，怎麼回事？
通常膠在30min-1h內凝。如果凝的太慢，可能是temed，aps劑量不夠或者失效。aps應該現配現用，temed不穩定，易被氧化成黃色。
如果凝的太快，可能是aps和temed用量過多，此時膠太硬易裂，電泳時易燒膠。
2樓：匿名使用者
藥品配製有問題，或者是藥品失效了，重新配藥品
配製sds-page 脫色液用什麼水
3樓：北京索萊寶科技****
250ml 95％乙醇＋80ml冰醋酸，定容到1000ml，即可．
或者100ml 95％乙醇＋50ml冰醋酸，定容到1000ml，即可．
裝機配製，請高手看下這個配製還可以不
你裝機吧，裝機的配置要比筆記本高很多，4000院內就能搞定，算是中檔了，筆記本效能屬於低檔，遊戲都不行。要是注重便攜性，就筆記本，要是不怎麼移動，就桌上型電腦。筆記本除了便攜的優點 效能根本不是桌上型電腦能比的 所有你需要效能就自己裝 如果你買筆記本的話還是別買神舟吧 這配置怎麼的我都懶得說了.算中...
高手給個配製建議
你用ddr2 800有什麼用 雙通道的533就是匯流排1066 再高了只是浪費 雙通道800還是工作在1066 工作頻率一樣 延遲時間也一樣 硬碟用兩塊sata80g的或兩塊160的組建raid 0磁碟陣列 系統速度才能上去 顯示卡用兩塊7600或單塊7950 這樣再挑主機板 選兩條pci e或單條...
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