結合實驗情況,如何提高限制性酶切的反應效率

2025-01-26 09:35:23 字數 2637 閱讀 7165

1樓:網友

dna純度。

在dna樣品中若含有蛋白質,或沒有去除乾淨製備過程中所用的乙醇、edta、sds、酚、氯仿和某些高濃度金屬離子,均會降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用。

2 核酸內切限制酶的緩衝液。

核酸內切限制酶的標準緩衝液包括氯化鎂、氯化鈉或氯化鉀、tris-hcl、巰基乙醇或二硫蘇糖醇(dtt)以及牛血清白蛋白(bsa)等。

使用所有限制酶均可發揮活性的一種緩衝液。

不同限制性內切酶對nacl濃度的要求不同,這是不同限制酶緩衝液組成上的乙個主要的不同。據此可分為高鹽、中鹽和低鹽緩衝液,在進行雙酶解或多酶解時,若這些酶切割可在同種緩衝液中作用良好,則幾種酶可同時酶切;若這些酶所要求的緩衝液有所不同,可採用以下三種方法進行消化反應:先用要求低鹽緩衝液的限制性內切酶消化dna,然後補足適量的nacl,再用要求高鹽緩衝液的限制酶消化;

先用一種酶進行酶解,然後用乙醇沉澱酶解產物,再重懸於另一緩衝液中進行第二次酶解。

3 酶切消化反應的溫度。

dna消化反應的溫度,是影響限制內切酶活性的乙個重要因素。不同的核酸內切限制酶,具有各自的最適反應溫度。多數限制內切酶的最適反應溫度是37℃,少數限制性內切酶的最適反應溫度高於或低於37℃。

4 dna的分子結構。

dna分子構型對核酸內切限制酶的活性有很大影響,如消化超螺旋的dna比消化線性dna用酶量要高出許多倍。

有些限制酶在消化它們自己的處於不同部位的限制位點,其效率也有明顯差異。

限制性內切酶反應的終止 通常是採用65℃條件下溫浴5min;

加終止反應液(如的edta使之在溶液中的終濃度達到10 mol/l)螯合mg2+,以終止反應。

如何設計實驗證明酶具有高效性

2樓:夏忻季卸

1、實驗材料、器材與試劑:

材料:約的馬鈴薯小塊(生、熟。)

器材:試管、移液管或吸量管、量筒。

試劑:(1)鐵粉 (2)2%的過氧化氫h2o2

2、實驗步驟:

1)選帶絕運取四個試管編號,各加入3ml的2%過氧化氫溶液。

2)1號加入生馬鈴薯兩塊,2號試管加入熟馬鈴薯2塊,三號試管加入一小勺鐵粉,4號試管作為對照組不做處理。四個試管同時加樣。

3)各個試管反應的快慢與劇烈程度,依據反應完成順序排序。

3、實驗總結。

1號試管反應最快,3號試管次之號試管最慢且一樣快。證明馬鈴薯中的過氧化氫酶與鐵粉一樣對於過氧化氫的分解有催化作用,但是過氧化氫酶更有高效性。

酶的競爭性抑制的實驗結論是什麼?

3樓:亞浩科技

1、當抑制劑存在時野銷譽,i 與e結合,v下降。

2、當s》i,et=es,轉變為e+p,vmax不變。

3.、鬥喚當有競爭性抑制劑存在時,e與s的結合力下降頌段,km增大。

**酶的高效性實驗步驟謝謝

4樓:匿名使用者

a、酶的高效性是和無機催化劑相比,酶降低化學反應所需要的活化能的作用更顯著,所以驗證酶的高效性時,自變數是催化劑的種類(酶和無機催化劑),a錯誤; b、酶的專一性是指一種酶只能催化一種或一類化學反應的特性,驗證酶的專一性時,可以是相同的底物不同的酶,也可以是不同的底物同一種酶,故自變數可以是不同的酶種類,也可以是不同的底物,b錯誤; c、酶的活性受溫度的影響,每一種酶都有其最適宜溫度,溫度過高或過低都會使酶的活性降低,甚至失去活性,**溫度對酶活性的影響時,自變數是溫度,c錯誤; d、酶的活性受ph的影響,每一種酶都有其最適宜ph,ph過高或過低都會使酶的活性降低,甚至失去活性,**酶催化作用的最適ph時,自變數是ph,無關變數有溫度、酶的種類和量、底物的種類和量等,d正確.故選:d.

如何設計實驗證明酶具有高效性

5樓:匿名使用者

很多練習題都有出現過阿。取樣,給兩隻試管分別加入2ml過氧化氫溶液,在常溫常壓條件進行,再往1試管加入兩滴氯化鐵,2試管加入兩滴含過氧化氫酶的東西(例如豬肝的研磨液)。過氧化氫被分解為氧氣和水。

觀察:哪支試管產生的氣泡多,分鐘後,將點燃的衛生香分別放入到液麵上方,看哪隻試管中的衛生香燃燒猛烈。要控制變數。

這是課本的試驗~~

試分析酶高效性的作用機制

6樓:花為誰栽

酶的催化機制包括酶如何同底物結合及酶如何加速化學反應肢友掘兩方面內容。

一)酶如何同底物告弊結合?解釋酶催化作用的中間產物學說已有相當實驗證據並得到公認。而且研究證明了酶與底物的結合,一般都在酶蛋白分子的活性部位發生,且底物靠許多弱的鍵力與酶結合。

解釋酶同底物結合方式(機制)的學說,首先是fischer提出的鎖鑰學說,繼而發展為koshland提出的誘導契合學說。前者認為酶與底物結合的方式可用鎖鑰結合假設來作解釋,但此學說認為酶活性部位的活性是剛性不變的。誘導契合學說則認為酶活性部位的構象是柔性可變的,因此酶與底物結合時,底物可以誘導酶的構象發生改變,變得與底物契合,進行反應。

二)酶如何加速化學反應?酶能加速化學反應的原因在於極大地降低了反應的活化能。酶如何降低反應的活化能而實現高效率與五個方面的重要因素有關,即(1)鄰近效應與定向效應;(2)底物分子的敏感鍵發生形變;(3)共價催化;(4)酸鹼催化;(5)酶分子歷核活性中心內部相對非極性的微環境的影響。

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