1樓:由佑平仇鸞
短時間的正宴寬話,將提取到的dna溶於無菌水或te緩衝液舉亮。
放於4℃祥跡冰箱儲存即可。
2樓:僑有福泥月
植物組織提取基因組dna
一、材料。幼嫩葉子。
二、裝置。移液器,冷凍高速離心機,臺式高速離心機,水浴鍋,陶瓷研缽,50ml離心管(有蓋)及5ml和離心管,彎成鉤狀的小玻棒。
三、試劑。1、提取緩衝液ⅰ:100mmol/l
tris·cl,,20mmol/l
edta,500mmol/l
nacl,提取緩衝液ⅱ:葡萄糖,二乙基二硫代碳酸鈉,,240ul巰基乙醇,加水至300ml。
4:16/氯仿:戊醇:乙醇。
rnasea母液。
5、其它試劑:液氮、異丙醇、te緩衝液,無水乙醇、70%乙醇、3mol/l
naac。四、操作步驟:
在50ml離心管中加入20ml提取緩衝液ⅰ,60℃水浴預熱。
幼苗或葉子5-10g,剪碎,在研缽中加液氮磨成粉狀後立即倒入預熱的離心管中,劇烈搖動混睜告勻,60℃水浴保溫30-60分鐘(時間長,dna產量高),不時搖動。
加入20ml氯仿悉攔明/戊醇/乙醇溶液,顛倒混勻(需帶手套,防止損傷**),室溫下靜置5-10分鐘,使水相和有機相分層(必要時可重新混勻)。
室溫下5000rpm離心5分鐘。
仔細移取上清液至另一50ml離心管,加入1倍體積異丙醇,混勻,室溫放置片刻即出現絮狀dna沉澱。
在eppendorf中加入1ml
te。用鉤狀玻璃棒撈出dna絮團,在乾淨吸水紙上吸乾,轉入含te的離心管中,dna很快溶解於te。
如dna不形成絮狀沉澱,則可用5000rpm離心5分鐘,再將沉澱移入te管中。這樣收衡陸集的沉澱,往往難溶解於te,可在60℃水浴放置15分鐘以上,以幫助溶解。
將dna溶液3000rpm離心5分鐘,上清液倒入乾淨的5ml離心管。
加入5μlrnasea(10μg/μl),37℃
10分鐘,除去rna(rna對dna的操作、分析一般無影響,可省略該步驟)。
加入1/10體積的3mol/l
naac及2×體積的冰乙醇,混勻,-20℃放置20分鐘左右,dna形成絮狀沉澱。
用玻棒撈出dna沉澱,70%乙醇漂洗,再在乾淨吸水紙上吸乾。
將dna重溶解於1ml
te,20貯存。
取2μldna樣品在。
agarose膠上電泳,檢測dna的分子大小。同時取15μl稀釋20倍,測定od260/od280,檢測dna含量及質量。
注意]5g樣品可保證獲得500μg
dna,足供rflp、pcr等分析之用。
3樓:鄭嘉儀
短時間儲存放在負二十度就行。
植物dna提取需要注意哪些細節
4樓:開發的深
1、 裂解液要預熱,以抑制dnase,加速蛋白變性,促進dna溶解。 2、 酚一定要鹼平衡。苯酚具有高度腐蝕性,飛濺到**、粘膜和眼睛會造成損傷,因此應注意防護。
氯仿易燃、易爆、易揮發,具有神經毒作用,操作時應注意防護。 3、 各操作步驟要輕柔,儘量減少dna的人為降解。 4、 取各上清時,不應貪多,以防非核酸類成分干擾。
5、 異丙醇,乙醇。naac,kac等要預冷,以減少dna的降解,促進dna與蛋白等的分相及dna沉澱。 6、 提取dna過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤乾等辦法進行無核酸酶化處理。
7、 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製。
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