1樓:糟油酒丸
童鞋這個問題有一點bai奇怪哦(我不知du道你是zhi否其實想問的是抗體等試劑的用量dao)。版
你所說的免疫熒光實驗,標本權
應該是細胞。理論上來說細胞的數量只要能夠覆蓋顯微鏡最低倍數的視野就可以了。實際上染色的當然要比一個視野多很多,才能選取***的影象。
一般來說,12-13毫米直徑的玻片剛好能夠放進24孔板,是做免疫熒光常用的大小。這個面積上面種多少細胞,同你的細胞型別及其單個細胞大小有關。做免疫熒光的話,細胞不應該長得太密。
我估計你每個樣本有幾萬個細胞就夠了。
核定位的蛋白做免疫熒光需要dapi染色麼
2樓:義翹神州加油
需要,輔助確定細胞核位置。義翹典型結果如下,可以作為參考。
3樓:路戍人
1.實驗原理
免疫染色的實驗原理類似於western blotting,兩者都是運用抗體的特異性識別作用來顯示目的蛋白,但是由於免疫染色需要在原位進行,而且蛋白沒有經過富集,因此其實驗難度較高。
實驗的基本原理是:利用固定劑(通常是甲醛或多聚甲醛)將細胞固定,使得細胞膜的通透性大大增加,並且利用triton-x-100使得一部分膜蛋白變性,從而使通透性進一步加強。利用正常羊血清封閉,可以令許多蛋白先與血清內的非特異性抗體結合,而特異性的抗體由於動力學的關係可以通過競爭性的反應與目的蛋白結合,這一過程可以保證抗體識別的特異性。
二抗可以特異性識別一抗的fc區域,利用二抗連線不同的熒光基團,就可以在熒光顯微鏡下觀察到不同的熒光,從而顯示目的基因的表達情況。
另外,免疫熒光實驗由於其較高的敏感性可以顯示出基因表達的亞細胞情況(核內,核外,膜上以及一些較大的細胞器上),所以通常被用來作為基因定位的方法。
dapi的中文名稱是4,6-聯脒-2-苯基吲哚,是一種常用的熒光染料,其作用機理與溴化乙錠(eb)等染色劑的機理類似:它們與dna雙螺旋的凹槽部分可以發生相互作用,從而與dna的雙鏈緊密結合。結合後產生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm,正好uv(紫外光)的激發波長是356nm,使得dapi成為了一種常用的熒光檢測訊號。
jagielski m. et. al在2023年首次運用該技術檢測細胞培養中的支原體感染。
後來隨著技術的進步,該技術被運用於各種微生物的檢測、生長監測,胚胎髮育過程的檢測,細胞週期的檢測和各種核定位的實驗。
做免疫熒光怎麼看蛋白是在細胞核表達還是胞漿表達
4樓:南京金益柏生物科技****
復染細胞核,常規用過的是dapi進行細胞核覆染(藍色)。目的是為了鑑別目的蛋白的位置是胞核表達,還是胞質表達或胞膜表達。
一般來講,如果是胞核表達,會和藍色的細胞核顏色重疊;胞質或胞膜表達則不會重合,單獨看目的蛋白的表達,會看到有個黑色的空洞的,尤其細胞影象更為明顯。
從樓主的**看,貌似是在胞核表達(因為紅色和綠色都很弱,在胞質沒有看到,相反卻和胞核重合了)
染色質量需要進一步提高。
5樓:匿名使用者
免疫組化和免疫熒光都是蛋白定位的檢測(也就是確定蛋白是表達在細胞核/漿/膜)。
免疫組織化學又稱免疫細胞化學,是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來,藉助顯微鏡的現像和放大作用,在細胞,亞細胞水平檢測各種抗原物質,並可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學技術現已有:
免疫熒光組織(細胞)化學技術、免疫酶組織(細胞)化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免疫熒光組織(細胞)化學技術是採用熒光素標記的已知抗體(或抗原)作為探針,檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原(或抗體),形成的抗原抗體複合物上帶有熒光素,在熒光顯微鏡下,由於受高壓汞燈光源的紫外光照射,熒光素髮出明亮的熒光,這樣就可以分辨出抗原(或抗體)的所在位置及其性質,並可利用熒光定量技術計算抗原的含量。以達到對抗原物質定位、定性、定量測定的目的。
免疫熒光如何做定量分析,求助免疫熒光的結果分析
和免疫組抄化一樣,只能通過軟體分析得出一個 數值 可以當一個 半定量 的指標,但我認為準確性差,如果是要分析蛋白的表達情況,建議用western比較好些。統計熒光強度的軟體沒有用過,以前只用過免疫組化的光密度分析軟體,影響結果的因素太多了。求助免疫熒光的結果分析 可以用image pro plus分...
細胞免疫熒光,求助,求助細胞免疫熒光的詳細操作步驟
大家互相之間充滿愛,讓世界充滿愛,讓我們一起努力,一起創造更美好版的世界吧 權 讓世界充滿愛 要說到 讓世界充滿愛 這個題目吧 我認為也不是非要捐錢啊,捐衣啊,捐一些書籍啊,等等.實 際我們只要能運用自己身邊所發生的小事來用實際行動來解決它們.那我將會相信我們的身邊會到處都充 滿著愛.求助 細胞免疫...
關於石蠟切片免疫熒光如何消除自發熒光
可以用遠紅外波長的熒光範圍內的二抗,在此範圍內基本看不到自發熒光的訊號 也可以用丙酮固定不用醛類物質。都可以減少自發熒光的產生 石蠟切片的免疫熒光可以對蛋白進行定量嗎 包埋好的復標本用切片 制機切石蠟切片 5微米 並將蠟片貼附於多聚賴氨酸處理過的載玻片上。經60 C烘片2 8小時 都試過,沒啥差別,...