1樓:匿名使用者
類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端
互補的寡核苷酸引物。pcr由變性版--退火(權復性)--延伸三個基本反應步驟構成:1模板dna的變性:模板dna經加熱至94°C左右一定時 聚合酶鏈式反應
間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;2模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至40~60°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;3引物的延伸:dna模板--引物結合物在dna聚合酶的作用下,於72°C左右,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。
每完成一個迴圈需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。參考資料:
pcr技術基本原理
2樓:末你要
一、pcr技術基本原理有:
1、pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
2、pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
1模板dna的變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
2模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;
3引物的延伸:dna模板--引物結合物在72°C、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈,重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
二、pcr的最大特點,是能將微量的dna大幅增加。因此,無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸,還是幾十年前**案中**所遺留的毛髮、**或血液,只要能分離出一丁點的dna,就能用pcr加以放大,進行比對。這也是「微量證據」的威力之所在。
3樓:我說二一
pcr是在試管中進行的dna複製反應,基本原理與細胞內dna複製相似,但反應體系相對較簡單,以原來的dna為模板產生新的互補dn**段。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:1模板dna的變性:模板dna經加熱至94°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;
2模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;
3引物的延伸:dna模板--引物結合物在taq酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
pcr技術,即聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,pcr)是由美國pe cetus公司的kary mullis在2023年(2023年獲諾貝爾化學獎)建立的。
這項技術可在試管內的經數小時反應就將特定的dn**段擴增數百萬倍,這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術在分子生物學研究中具有舉足輕重的意義,極大地推動了生命科學的研究進展。它不僅是dna分析最常用的技術,而且在dna重組與表達、基因結構分析和功能檢測中具有重要的應用價值。
pcr可以被認為是與發生在細胞內的dna複製過程相似的技術,其結果都是以原來的dna為模板產生新的互補dn**段。細胞中dna的複製是一個非常複雜的過程。參與複製的有多種因素。
pcr是在試管中進行的dna複製反應,基本原理與細胞內dna複製相似,但反應體系相對較簡單。
4樓:醉冰軒主
(1)pcr技術的基本原理:該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板,藉助一小段雙鏈dna來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下,dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3 ́-oh末端,並以此為起始點,沿模板5 ́→3 ́方向延伸,合成一條新的dna互補鏈。
pcr反應的基本成分包括:模板dna(待擴增dna)、引物、4種脫氧核苷酸(dntps)、dna聚合酶和適宜的緩衝液。類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:1模板dna的高溫變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;2模板dna與引物的低溫退火(復性):
模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;3引物的適溫延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
(2)pcr的反應動力學: pcr的三個反應步驟反覆進行,使dna擴增量呈指數上升。反應最終的dna 擴增量可用y=(1+x)n計算。
y代表dn**段擴增後的拷貝數,x表示平(y)均每次的擴增效率,n代表迴圈次數。平均擴增效率的理論值為100%,但在實際反應中平均效率達不到理論值。 反應初期,靶序列dn**段的增加呈指數形式,隨著pcr產物的逐漸積累,被擴增的dna 片段不再呈指數增加,而進入線性增長期或靜止期, 即出現「停滯效應」 ,這種效應稱平臺期數、pcr 擴增效率及dna聚合酶pcr的種類和活性及非特異性產物的竟爭等因素。
大多數情況下,平臺期的到來是不可避免的。
(3)pcr擴增產物 :可分為長產物片段和短產物片段兩部分。短產物片段的長度嚴格地限定在兩個引物鏈5'端之間,是需要擴增的特定片段。
短產物片段和長產物片段是由於引物所結合的模板不一樣而形成的,以一個原始模板為例,在第一個反應週期中, 以兩條互補的dna為模板,引物是從3'端開始延伸, 其5'端是固定的,3' 端則沒有固定的止點,長短不一,這就是「長產物片段」。進入第二週期後,引物除與原始模板結合外,還要同新合成的鏈(即「長產物片段」)結合。引物在與新鏈結合時, 由於新鏈模板的5'端序列是固定的, 這就等於這次延伸的片段3'端被固定了止點, 保證了新片段的起點和止點都限定於引物擴增序列以內、形成長短一致的「短產物片段」。
不難看出「短產物片段」是按指數倍數增加, 而「長產物片段」則以算術倍數增加, 幾乎可以忽略不計, 這使得pcr的反應產物不需要再純化,就能保證足夠純dn**段供分析與檢測用。
5樓:倚樓丶丶聽風雨
pcr技術的原理是什麼
6樓:苦苦gg怪
dna的雙螺旋結構與鹼基互補配對
7樓:匿名使用者
pcr也叫聚合酶鏈式
鏈式反應呈指數增長
pcr的原理是半保留複製
同時在pcr儀中需要的是taq酶,taq酶是從thermus aquaticus細菌中提取的耐熱dna聚合酶
8樓:匿名使用者
pcr(聚合酶鏈式反應)技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性→退火→延伸三個基本反應步驟,熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針(bioghc elitefast sybr kit)和熒光染料(bioghsc super probe kit),pcr的應用:核酸定量分析。
對傳染性疾病進行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型h1n1流感, 轉基因動植物基因拷貝數的檢測,rnai 基因失活率的檢測等; 基因表達差異分析。 比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學處理等 ) ,特定基因在不同時相的表達差異以及cdna晶片或差顯結果的確證。
pcr的基本原理是什麼?其基本流程如何?
9樓:靠名真tm難起
一、基本原理:pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。
雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在dna聚合酶的參與下,根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。
在實驗中發現,dna在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制dna的變性和復性,加入設計引物,dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
二、pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
1、模板dna的變性:模板dna經加熱至93°C左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備。
2、模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55°C左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。
3、引物的延伸:dna模板--引物結合物在72°C、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
求助pcr技術試劑盒的選購問題，PCR試劑盒問題
一般試劑盒主要是針對酶分類，其次是分為簡易操作混合體系和分開單獨體系。先說酶，你的基因如果是小於2k，那麼普通的高保真酶就可以滿足，比如pfu，或者takara公司的ex taq。如果是長片段就選擇各公司針對長片段設計的酶。如果不需要對序列保真度要求很高，只需要鑑定一下，那麼普通的taq酶就夠了。針...
pcr的ct值,PCR的Ct值
ct值 c代表baicycle,t代表threshold,ct值的含du義是 每個 反應zhi管內的熒光訊號到達設定的域值時 dao所經歷的迴圈數內 pcr反應的前容15個迴圈的熒光訊號作為熒光本底訊號,熒光域值的預設設定是3 15個迴圈的熒光訊號的標準偏差的10倍 熒光pcr擴增的ct值是什麼意思...
PCR反應過程中94與72之間反應體系發生著什麼反應，72與55之間又發生著什麼反應
在94度時，所有雙鏈都是解離狀態，自由碰撞。由於溫度過高，及時互補鏈相遇，也無法形成氫鍵。當溫度向55度降低時，互補鍊形成氫鍵的機率逐漸增大，由於引物的濃度大大超過以擴增的互補鏈，所以引物和互補鏈的結合開始增多，溫度降低到引物的tm溫度時，理論上已經有一般的互補鏈已經和引物結合了。降到55度時，結合...