1樓：匿名使用者
樣品 可以用細胞 也可以用細胞裡提取的dna
試劑 dna聚合酶（依賴於你的目的選擇普通taq酶還是高保真taq酶）
dna聚合酶附帶的緩衝液，mgcl2（可能有可能沒有，沒有的一般是公司新增到額緩衝液裡了）
dntp：四種脫氧核糖核苷酸
無菌水迴圈條件: 95℃ 3~10min
95℃ 30sec
55℃（取決於你的引物的退火溫度，可以用梯度pcr摸索） 30sec total 25~35 cycle
72℃ 60sec（時間取決於你的酶的擴增效率與要擴增片段的長度，酶的說明書上有）
72℃ 10min
4℃ hold
2樓：歐陽靈霞
模板dna，四種dntp原料(atp.ctp.ttp.gtp)，引物，taq酶。一般來說，在酶未飽和、原料充足的情況下，pcr可迴圈。
3樓：匿名使用者
試劑與樣品：模板dna,buffer（包含有mg+），dntp,引物，dna聚合酶。
迴圈條件，根據你的目的產物的片段大小，及引物的退火溫度，都不一樣的我之前用過的一個程式是這樣的
95℃ 5min
95℃ 30sec
57℃ 30sec total 35 cycle
72℃ 60sec
72℃ 5min
4℃ forever
pcr擴增用的試劑有哪些？
4樓：北京索萊寶科技****
pcr擴增所用的試劑：
pcr擴增步驟：
1．細菌染色體dna的提取（見上一組）
2．rapd反應體系的配置（上圖）
3·反應程式：將rapd反應試劑加入ep管中 輕混後用100ul石蠟油覆蓋於反應混合液之上，防止樣品在反覆加熱-冷卻的過程中蒸發，蓋好蓋子。
開啟pcr反應儀輸入以下反應資料
· 94 攝氏度預變性5min
· 94攝氏度變性40s
· 40攝氏度退火40s
· 72攝氏度延伸1min
將ep管放入儀器開始擴增，迴圈35次；72攝氏度延伸10min
注意事項：
1、pcr反應體系中dna樣品及各種試劑的用量都極少，必須嚴格注意吸樣量的準確性及全部放入反應體系中。
2、為避免汙染凡是用在pcr反應中的tip尖、離心管、蒸餾水都要滅菌；吸每種試劑時都要換新的滅菌tip尖。
3、加試劑時先加消毒三蒸水，最後加dna模板和taq dna聚合酶。
4、置pcr儀進行pcr反應前，pcr管要蓋緊，否則使液體蒸發影響pcr反應。
5、引物條件首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物與引物之間避免形成穩定二聚體或髮夾結構，再次引物不能在模板的非目的位點引發dna聚合反應（即錯配）。
5樓：匿名使用者
對於一般的pcr實驗（非特殊情況），主要試劑是：引物（上、下游引物），taq酶、dntp、mg2+、緩衝液buffer。當然，還需要準備你待擴增用的dna。
6樓：
反應體系：
2xbioghc elitefast sybr mastermix 10μl
上下游引物 (10μm) 各0.4μl模板dna 10ng-1μg
50 × rox 0.4μl
ddh2o 加至20µl
介紹bioghc elitefast sybr kit採用本公司生產的經化學修飾的熱啟動聚合酶，有效避免了非特異擴增和引物二聚體的形成，具有高度的特異性。反應緩衝液經多次優化，與熱啟動聚合酶具有最為樂觀的搭配，使聚合酶的活效能夠得到最大程度的發揮。反應靈敏快速，40個迴圈只需20多分鐘的時間。
在20µl的反應體系裡，只要有幾個拷貝的dna分子就能被檢測出來。bioghc elitefast sybr kit具有非常強的抗干擾能力，能夠對土壤、糞便、腫瘤和血液**的複雜樣本中的靶基因進行檢測，也能不經處理直接對菌落、血液、土壤和糞便中的靶基因進行檢測分析。試劑盒以預混液的形式包裝，使用極其方便。
說明：1、bioghc elitefast sybr master mix包含dntp mix、mg2+、sybr green i、biog熱啟動聚合酶。2、一般來說反應體系中引物終濃度為0.
2μm可得到較好的擴增效果。當反應結果不理想時，可以在0.1-1.
0μm範圍內調整引物濃度。3、qpcr反應靈敏性高，模板量的準確性對結果影響很大，建議將模板適度稀釋後加入，或用50ul反應體系。4、模板體積最好不超過反應體積的10%，操作過程中避免強光照射。
5、擴增產物長度請選擇在100bp-500bp範圍內。 6、反應條件：95℃加熱6-10分鐘，以啟用熱啟動dna聚合酶，然後95℃ 5-15秒，60℃ 30-35秒，進行40個迴圈。
反應條件可根據目標片段的大小、引物的tm值等適當調整。
什麼是pcr?
7樓：鬆恭載琬
pcr（polymerase
chain
reaction
）即聚合酶鏈式反應
pcr技術的基本原理：該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板，藉助一小段雙鏈dna來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合，形成部分雙鏈。
在適宜的溫度和環境下，dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3´-oh末端，並以此為起始點，沿模板5´→3´方向延伸，合成一條新的dna互補鏈。
pcr反應的基本成分包括：模板dna(待擴增dna)、引物、4種脫氧核苷酸(dntps)、dna聚合酶和適宜的緩衝液。類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板dna的高溫變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板dna與引物的低溫退火(復性)：
模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；③引物的適溫延伸：dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna
鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性-退火-延伸三過程，就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，
2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
8樓：春玉英進婷
pcr是聚合酶鏈式反應。這個反應的發生需要目標dna，也需要聚合酶（要不怎麼叫聚合酶鏈式反應呢？）還有4種脫氧核苷酸a、g、c、t。
（注意，a、g、c、t是他們的鹼基，在一定情況下也能指代核糖核苷酸核苷酸或脫氧核苷酸。）
我估計能問這個問題的人不是個初學者就是個高深莫測的人……
9樓：自由之聲了
是手遊princess connect!re dive（公主連結r）的簡稱
10樓：麥兜櫻
pcr就是一種用來大量複製目的基因的生物技術
在pcr反應中，經過n次迴圈，理論上dna鏈的數目擴增了多少倍
11樓：
理論上是2的n次方，但會有平臺效應的影響
12樓：遇學卯菀菀
2^（n+1）-2
第二一次迴圈後合成兩條含引物的單鏈（兩條dsdna，但不包括模板）1x2^2-2;
第二次為2x2x2-2，第n次為2x2^n-2=2^（n+1）-2
pcr儀使用時，在設定反應程式時，一共分了多少個步驟
什麼是pcr檢測？他的原理是什麼？需要什麼材料？
13樓：中國風習
pcr（聚合酶鏈反應）：類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
基本原理：pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性主要依賴於和靶序列兩端互補的寡核苷酸引物，它由變性——復性——延伸三個基本反應步驟構成。
所需材料：
模板dna
正二價鎂離子
引物反應緩衝液
taqdna聚合酶
拓展回答：
反應特點
特異性強。
pcr反應的特異性決定因素為：
①引物與模板dna特異正確的結合。
②鹼基配對原則。
③taq dna聚合酶合成反應的忠實性。
④靶基因的特異性與保守性。
靈敏度高。
pcr產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，pcr的靈敏度可達3個rfu(空斑形成單位）；在細菌學中最小檢出率為3個細菌。
簡便、快速。
pcr反應用耐高溫的taq dna聚合酶，一次性地將反應液加好後，即在dna擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性汙染、易推廣。
純度要求低。
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，dna 粗製品及rna均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛髮、細胞、活組織等dna擴增檢測。
分析體內DNA複製和體外PCR擴增DNA有何異同點
pcr實際上是在體外模擬dna體內複製的過程。和體內dna複製一樣，pcr在擴增dna的時候也會經歷dna雙鏈的解開 變性 寡聚核酸與單鏈dna的結合 退火 以及dna聚合酶開始合成dna 延伸 的三個過程。但pcr和體內dna複製不同，在體內dna的複製整個過程是由一系列酶所控制的，所以像dna解...
熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼原因
最常見的是樣本的擴增效率很差,所以到了平臺期也不是很強,這樣基線就相對很高了。熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼原因 探針濃度過高 體系中有熒光物質汙染 擴增效率低 我師兄用biog熒光定量pcr試劑盒擴增效果特別好,曲線非常典型,反應速度也很快,沒有遇到這個問題 熒光定量pcr擴增曲線基線過高什麼...
目的基因的擴增曲線,都怎麼看,定量pcr目的基因擴增曲線不好但是ct值很高怎麼回事
你好,擴增曲線可以粗略地判斷擴增效率。sybr green的雙delta ct法要求目的基因和內參的擴增效率基本一回 致。如果答不一致,需要對公式進行修正,部分qpcr儀的配套軟體可以做到,直接輸入每對引物的擴增效率。但無論如何,保證高擴增效率是實驗成功的關鍵。如果擴增效率一致,不同ct的曲線顯示出...