1樓：匿名使用者
轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的dna結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。螢光素酶報告基因實驗（luciferase assay）是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段。
其原理簡述如下：
1）構建乙個將靶啟動子的特定片段插入到螢光素酶表達序列前方的報告基因質粒，如pgl3-basic等。
2） 將要檢測的轉錄因子表達質粒與報告基因質粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系。如果此轉錄因子能夠啟用靶啟動子，則螢光素酶基因就會表達，螢光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比。
3） 加入特定的螢光素酶底物，螢光素酶與底物反應，產生螢光，通過檢測螢光的強度可以測定螢光素酶的活性，從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。
2樓：任響
當地吞痔印刷簇首。
螢光素酶報告基因的技術流程
3樓：布思珈藍
（1） 用生物資訊學方法分析並**啟動子區可能的轉錄因子結合位點。
2）設計引物用pcr法從基因組dna中轉殖所需的靶啟動子片段，將此片段插入到螢光素酶報告基因質粒（pgl3-basic）中。
3）篩選陽性轉殖，測序。擴增轉殖並提純質粒備用。
4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒對照，提純備用。
5） 培養293（或其它目的細胞），並接種於24孔板中，生長10-24小時（80%匯合度）。
6） 將報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞。
7）提取蛋白並用於螢光素酶檢測。
8） 加入底物，測定螢光素酶的活性。
9） 計算相對螢光強度，並與空載對照比較。
螢光素酶報告基因的應用原理
4樓：匿名使用者
螢光素酶報告基因是指以螢光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲螢光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。螢光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發出生物螢光(bioluminescence)。
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檢測螢光素酶報告基因發出螢光的都有什麼儀器?
5樓：網友
luminex, 螢光分光光度儀，螢光凝膠成像儀，液閃儀 ，螢光酶標儀，螢光顯微鏡。
都很貴。推薦螢光酶標儀和螢光顯微鏡。
luminex是液體晶元測定，同時檢測30個目的蛋白，定量，靈敏。
螢光分光光度儀用途比較侷限，不方便。
螢光凝膠成像儀的物件是凝膠。
液閃儀和luminex很像，但是隻能檢測乙個蛋白或靶標。
螢光酶標儀就是酶標儀，但是可以檢測螢光訊號，同時可以測定至少96個樣品的單一靶標。
螢光顯微鏡不能定量，但非常直觀，可以看到是那些細胞發光，以及發光的部位。而且可以同時看到1-3種螢光，**比前者低些。
螢光素酶報告基因的結果在什麼範圍算是陽性
6樓：醜安夢
只能先就標題的問題談談我的認識。後面的追問我瞭解得也不全面。
1。兩者的結果檢測方法不同。gfp綠色螢光蛋白，很直觀，能夠直接檢到螢光，在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到，對細胞的生命活動和其他並行的實驗安排影響很小。
螢光素酶報告基因使用起來比gfp多乙個步驟，因為螢光素酶是個酶，不發螢光，發螢光的是它的底物，螢光素。螢光素在細胞裡（要說螢火蟲細胞我就不知道了哦）是沒有的。
所以檢測螢光素酶的通常步驟是裂解細胞，釋放螢光素酶，與螢光素及其他所需化學物質混合，才得到螢光。現在雖然也有活細胞內檢測螢光素酶的手段，但要將螢光素送入活細胞，本身就已要對細胞進行相當的干擾。所以一般來說螢光素酶實驗的同一批細胞不適合再做其他並行實驗。
2。兩者的結果含義不同。gfp如果說是定量檢測表達蛋白的話，這個定量只能夠指，表達的細胞是多少個，不表達的細胞是多少個。
gfp對於單個細胞來說，就有陽性和陰性兩種結果罷了。gfp不能夠定量地告訴你，這個/群細胞裡的表達量是多高還是多低。螢光素酶就能夠定量地得到表達量/表達水平的數值，但這個數值是相對於一群細胞來說，而不是對於單個細胞。
所以螢光素酶常常用來研究啟動子的功能與調控，因為啟動子對基因表達的調控可以是漸變的，而不是簡單的開和關兩種狀態。
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