1樓：_baby大人
我做過g-25柱，效果不錯。
我所在小組也用過磷酸緩衝液做純化，也用透析除鹽，同樣也遇到過和你一樣的問題，洗脫峰明明有光吸收，可是就是跑膠沒帶，現在這個問題已經解決，呵呵，很有可能你跟我們的問題一樣。
問題關鍵是：蛋白濃度！
我們的蛋白本身易降解，且純化率低，蛋白濃度很低，再加上透析、除鹽等複雜步驟，脆弱的蛋白又被大量稀釋，那麼增加初始蛋白**不就可以了麼？將原始菌液擴大好幾倍，最後將蛋白進一步濃縮再跑膠，於是看到了漂亮的目的蛋白帶~~~
另：我不認為你的蛋白樣品成分會影響電泳（除非樣品含鹽量過高，蛋白會跑不動）
以上敘述不是全部，蛋白純化是比較複雜的問題，想要做好，是需要摸很多條件的。以上僅供參考。
2樓：***
那就是中間丟掉了。將中間物一起電泳，看看是哪一步出錯。
包括：原液（相當於陽性對照），除鹽後的樣品，層析上樣時流出液，洗雜蛋白時的流出液，最後收集的樣品。如果中間還有操作，每一步也要檢測。
你是怎麼除鹽的？什麼層析？
3樓：我來煮稀飯
1：純化後跑電泳，包括原液，除鹽後樣品，穿透，洗雜蛋白樣品，洗目的蛋白樣品
2：可以加大電泳樣品上樣量
3：蛋白可能很容易降解，可加蛋白酶抑制劑嘗試一下，不過有的蛋白即使加蛋白酶抑制劑也沒用處。
4：可能beads用久了，更換新beads5：按照你的說法你的蛋白應該是大腸桿菌上清表達的吧，可以加大咪唑濃度洗脫，有的蛋白必須用1m的咪唑才能洗脫下來
暫時想到這麼多
4樓：在幻想與夢想中
加樣濃度，配膠的質量。
關於蛋白質電泳的問題
5樓：匿名使用者
不知你的a蛋白是什麼？
一般來說，五條帶從（距離點樣點）遠到近分別是：清蛋白、.α1、α2、β、γ，後面四個都是球蛋白。
蛋白電泳遇到的問題
6樓：
不是問題，時間一長就是這個樣子。 是不是倆邊的部分全變成藍色，中間的在沒幹透時能看出是分帶，但是乾透之後就變成一整個白的了？ 這個實驗的分帶觀察不應該在它全乾透。
電泳完時應該能看出來的，不是出現一個全白的，你的如果剛做完也時這個樣子，那應該是你的實驗步驟有問題，還有，如果正常操作，一般都能看出有三個分帶。
7樓：夷逸雅顧依
電泳是在電場作用下帶電離子根據其遷移率不同進行分離的技術。該技術簡單，但卻是研究蛋白性質的一個非常有用的手段。蛋折的遷移率與其結構衙環境都有關係，大多數電泳都有固定介質如聚丙烯醯胺膠和瓊脂糖膠中完成的，聚丙烯醯胺膠適合蛋白和小的核酸的分離，瓊脂糖膠適合大到蛋白複合物的分離。
因為沒有一種方法會得到全部的資訊，所以根據不同的物理特性，已發展出多種電泳方法。最常用的幾種聚丙烯醯胺凝膠電泳技術如下：sds-page：
在分子篩的凝膠中根據蛋白質的分量進行分離。sds變性劑與所有蛋白結合，破壞結構、使其變性，所帶的負電荷與其大小成正比，因此蛋白的遷移率只與蛋白的分子有關，與電荷和形狀無關。native
page:
在非變性的條件下分離蛋白質，對於任何一種分離介質，遷移率都與蛋白的大小、電荷和形狀有關。電泳分離後，可進下步分析蛋白的活性和結構。ief（等電聚焦）：
在ph梯度膠中根據蛋白質的等電特點進行分離，在蛋白質等電點處，蛋白所帶電荷為零。根據後續蛋白的應用，可使用變性或非變性的膠。等電聚焦電泳的解析度非常高。
你好，向你請教蛋白質電泳的問題，謝謝。
8樓：葉綠蛋白
你這個有可能是
1脫色不全 建議再脫色一會
2如果跑的是總蛋白的話，有可能會出現連續的藍色條帶。
3 藍白相間的豎條紋？我猜這是橫條紋吧……
蛋白質電泳
9樓：匿名使用者
你的電泳不加蛋白marker的？
你的問題就是下面的條帶附件有拖帶和彌散的痕跡，如果有蛋白marker一起跑就更容易判斷一些。如果蛋白marker正常不拖帶，那就是你樣品的問題。如果蛋白marker也彌散拖帶那sds膠的原因就更大一些。
最大可能一般還是溶液的原因，有可能是蛋白所在緩衝液影響，也有可能是sds溶液時間太久了，或者ap質量不好。
蛋白質電泳,關於蛋白質電泳的問題
首先蛋白質電泳,通常是指sds page,這種電泳的特點是蛋白主要是按其大小分離開的。內 1 如果這容兩部分的肽鏈大小一樣,還是一條帶 2 n種蛋白未必是n條帶,有可能有大小一致的重疊在一起 3 肽鏈是蛋白質的一級結構序列,蛋白質是肽鏈經過盤曲摺疊形成的具有一定空間結構的物質。sds page之前會...
蛋白質電泳條帶怎麼看,血清蛋白電泳時,條帶前面是什麼,順序是什麼,為什麼
蛋白質電泳 條帶復怎麼看 不能嚴格制定量,只能互相比較bai。無論什麼染色法du,條帶亮度會zhi隨著染液多少及dao染色時間的不同而變化,無法嚴格定量。page的作用更多的是看目的條帶的大小,以及兩個樣品中相同蛋白互相比較多少。不能精確算出是多少ug或ng。1.直接將帶條帶的凝膠放在 凝膠呈像系統...
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