1樓：百小度
（1）蛋白質的不同對測定結果的影響。當蛋白質不同，其包含的上述小基團含量發生變化時，就會影響蛋白質含量的測定。
（2）溶液中干擾物質的影響。蛋白質所包括的具有紫外吸收的小基團為常見基團，其產生紫外吸收的特異性並不強，一些高濃度的無機化合物也會對蛋白質的含量測定產生干擾，
蛋白質是有機大分子，是構成細胞的基本有機物，是生命活動的主要承擔者。沒有蛋白質就沒有生命。氨基酸是蛋白質的基本組成單位。它是與生命及與各種形式的生命活動緊密聯絡在一起的物質。
2樓：匿名使用者
（1）蛋白質的不同對測定結果的影響。由於蛋白質是生物大分子，而紫外吸收往往是其分子內的小基團所引起的，例如酪氨酸、苯丙氨酸，色氨酸和肽鍵等等。因此當蛋白質不同，其包含的上述小基團含量發生變化時，就會影響蛋白質含量的測定。
然而蛋白質種類繁多，結構複雜，很難對其進行有效的歸類。例如人體內含蛋白質的種類約有10萬種，整個生物界的蛋白質種類估計有100億種。建議：
測量過程中如果條件允許，應儘量使用相近的蛋白質做標準曲線，修正測量引數，以便得到更為準確的數值。（2）溶液中干擾物質的影響。由於蛋白質所包括的具有紫外吸收的小基團為常見基團，其產生紫外吸收的特異性並不強，很多具有類似結構的有機溶劑都會有類似的紫外吸收，如醇、酮、醛、醚、有機酸、醯胺類，這些混入蛋白質溶液都會對測量產生干擾。
另外，一些高濃度的無機化合物也會對蛋白質的含量測定產生干擾，例如naoh、naci等等。建議：測量時應儘量排除干擾物質，同時選擇合適的參比溶液。
（3）溶劑吸收的影響。如果以一些在紫外區有吸收的物質做溶劑（例如醇、酮類），會對測量結果產生很大的影響。建議：
測量時儘量不要使用此類溶劑，或者在測量時選擇合適的參比。（4）ph對測定的影響。ph變化時對蛋白質含量測定的影響非常大，例如：
下圖為tyr的吸收譜線與ph的關係。由圖可以發現，ph=6和ph=13時，光吸收度已經有了非常大的差異。lmax at ph 6:
274 nmlmax at ph 13: 295 nm建議：測定樣品時不要使溶液處於過酸或者過鹼的狀態，同時樣品的ph值要與標準品的ph值儘量保持一致。
（5）環境極性、蛋白質構象、蛋白質摺疊與變性都會對蛋白含量的測定產生影響。
3樓：匿名使用者
主要是其他含氮物質吧，比如尿素，三聚氰胺
檢測食品中蛋白質含量的原理和方法是什麼？
4樓：匿名使用者
凱氏定氮法是由丹麥化學家凱道爾於2023年建立的，現已發展為常量、微量、平微量凱氏定氮法以及自動定氮儀法等，是分析有機化合物含氮量的常用方法。 凱氏定氮法的理論基礎是蛋白質中的含氮量通常佔其總質量的16%左右(12%~一19%),因此，通過測定物質中的含氮量便可估算出物質中的總蛋白質含量(假設測定物質中的氮全來自蛋白質)，即: 蛋白質含量=含氮量/16%。
即: 蛋白質含量=含氮量/16%。例如：氮4克. 4÷0.16(16%)=25k蛋白質
蛋白質測定的多種方法
[1] 凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來併為過量的硼酸液吸收，再以標準鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。
5樓：匿名使用者
目前食品中蛋白子含量的測定通常採用凱氏定氮法。
凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣餾出併為過量的酸液吸收，再以標準鹼滴定，就可計算出樣品中的氮量。由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。
凱氏定氮法檢測的是粗蛋白，原理是檢測其中的氮含量，因為氮含量在真蛋白中大約 是16%左右，倒數就是6.25，所以，檢測出氮含量後，乘以6.25就是粗蛋白含量了。
凱氏定氮法的缺點是把非蛋白中的氮也算進去了，所以，才會有前幾年出現的三聚氰胺的事件，三聚氰胺是非蛋白氮，用凱氏定氮法檢測時，也把它算進去了，這就是奶粉造假的依據。
6樓：匿名使用者
凱氏定氮法，原理是蛋白質中氮元素的含量比較穩定，大約 是16%左右，倒數就是6.25，所以，檢測出氮含量後，乘以6.25就是粗蛋白含量了
影響蛋白質的等電點測定實驗結果準確性的因素有哪些
7樓：芥末留學
1、樣品消化的bai完全程度。如：du被濃硫酸脫水的樣品（有機zhi物），
dao炭化成的氮，由於消化不
內完全就不能被二氧容化硫完全還原成氨，就會造成測定結果偏低。
2、消化溫度。消化食不能用強火，應保持緩和沸騰，以免粘附在凱氏瓶內壁上的含氮化合物在無硫酸存在的情況下未消化完全而造成氮損失。
3、蒸餾裝置的氣密性。若氣密性差（漏氣），蒸餾出來的氨氣就會揮發流失。（所以，漏斗加鹼後應立刻水封，以免氨氣由此處逸出而造成損失。）
4、吸收液的溫度。硼酸吸收液的溫度不應超過40℃，否則對氨的吸收作用減弱，而造成氨損失。
國家標準檢測蛋白質含量測定方法
8樓：匿名使用者
蛋白質含量測定方法就是檢測n元素的含量，像三聚氰胺的問題，就是通過增加n的含量使「蛋白質」含量提高的。
國家標準檢測蛋白質含量的方法叫做凱氏定氮法，食物中的蛋白質在催化加熱條件下分解，導致氨和硫酸結合產生硫酸銨。 鹼蒸餾採用無硫，硼酸吸收，用硫酸或鹽酸標準滴定溶液滴定，根據酸耗計算氮含量，再乘以轉化係數，即蛋白質含量。
具體操作步驟如下：
1.樣品處理
精確稱量0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸收10-20ml液體樣品（約30-40mg氮當量）。
將其轉移至乾燥的100毫升或500毫升氮氣固定瓶中，加入0.2克硫酸銅，6克硫酸鉀和20毫升硫酸，輕輕搖動，在瓶口放置一個小漏斗，將瓶子傾斜石棉網上有45度角，有小孔。
加熱小火後，內容物碳化，泡沫完全停止，加強火力，保持瓶內液體稍微沸騰，直至液體呈藍綠色澄清透明，然後繼續加熱0.5小時。取出並冷卻，小心加入20毫升水，冷卻，移入100毫升容量瓶中，用少量水洗淨氮氣瓶，洗淨液放入容量瓶中，然後用水沖洗至刻度，混勻備用。
取相同量的硫酸銅，硫酸鉀和濃硫酸作為試劑進行空白試驗。然而，這種方法很危險，很難在實驗室中證明。大多數實驗室都有一個消化器，可以一次處理16個以上的樣品和一個可以自行設定溫度的呼吸機。
它更安全，更可操作。
2.裝好定氮裝置
根據附圖安裝氮固定裝置。 在約2/3的水蒸氣發生器中加入幾滴甲基紅指示劑和幾毫升硫酸以保持水呈酸性。 新增幾個玻璃珠以防止突然沸騰。 蒸汽發生瓶中的水由壓力調節器加熱。
3.向接收瓶內加入試劑
將10ml 2％硼酸溶液和一滴混合指示劑加入到接收瓶中，並將冷凝管的下端插入液麵下。將10.0ml樣品消化液從小玻璃吸收到反應室中，用10ml水洗滌小燒杯以流入反應室，並擰緊小玻璃棒玻璃塞。
將10ml 40％氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯中，抬起玻璃塞使其緩慢流入反應室，不能立即將玻璃蓋塞緊，這樣容易使玻璃塞粘在樣品入口處，應先用蒸餾水清洗然後蓋上，並在小玻璃杯中加水以防止洩漏。
夾緊螺旋夾並開始蒸餾。蒸汽進入反應室，氨通過冷凝管進入接收瓶。蒸餾持續5分鐘。
移動接收瓶，使冷凝管的下端離開液體容器，然後蒸餾1分鐘，然後用少量水沖洗冷凝管下端的外端。取下接收瓶，將其置於0.05n硫酸或0.
05n鹽酸標準溶液中，以灰色或藍紫色為目的地。
擴充套件資料
除了凱氏定氮法以外，標準的測量方法還有：
分光光度法
食品中的蛋白質在催化加熱條件下被分解，分解產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨，在ph4.8的乙酸鈉-乙酸緩衝溶液中與乙醯丙酮和甲醛反應生成黃色的3,5-二乙醯-2,6-二甲基-1,4-二氫化吡啶化合物。在波長400nm 下測定吸光度值，與標準系列比較定量,結果乘以換算係數，即為蛋白質含量。
燃燒法樣品在900~1200℃下燃燒。在燃燒過程中，產生混合氣體。 諸如碳，硫和鹽的干擾氣體被吸收管吸收，氮氧化物被還原成氮。 形成的氮氣流由熱導檢測器（tcd）檢測。
9樓：life大林子
蛋白質含量測定主要有五
種方法,分別是凱式定氮法、雙縮脲法、紫外吸收法、酚試劑法和考馬斯亮藍法。
1.凱氏定氮法：
蛋白質是含氮的化合物。食品與濃硫酸和催化劑共同加熱消化,使蛋白質分解,產生的氨與硫酸結合生成硫酸銨,留在消化液中,然後加鹼蒸餾使氨遊離,用硼酸吸收後,再用鹽酸標準溶液滴定,根據酸的消耗量來乘以蛋白質換算係數,即得蛋白質含量。因為食品中除蛋白質外,還含有其它含氮物質,所以此蛋白質稱為粗蛋白。
2.雙縮脲定氮法：
在強鹼性溶液中,雙縮脲與cuso4形成紫色絡合物,稱為雙縮脲反應。凡具有兩個醯胺基或兩個直接連線的肽鍵,或能過一箇中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應。紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。
測定範圍為1~10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有:硫酸銨、tris緩衝液和某些氨基酸等。
3.紫外吸收定氮法：
蛋白質分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,使蛋白質具有吸收紫外光的性質。形成顏色產物的量取決於蛋白質的濃度。實際測定時,必須預先用標準蛋白質溶液製作一個標準校正曲線,通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質標準溶液。
不同濃度的標準蛋白質溶液加入雙縮脲試劑後,反應生成的顏色產物用紫外-可見分光光度計在540nm 波長下測定吸光度,以雙縮脲試劑加緩衝或水作空白對照。然後將測得的值分別對蛋白濃度(mg/ ml) 作圖,得標準曲線。
未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理,根據測得吸光度值在標準曲線上直接查得未知蛋白質樣品中得蛋白質濃度。進行紫外吸收法測定時,由於蛋白質吸收高峰常因ph的改變而有變化,因此要注意溶液的ph值,測定樣品時的ph要與測定標準曲線的ph相一致。
4.酚試劑法：
此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即folin —酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深藍色的原因是:
①在鹼性條件下,蛋白質中的肽鍵與銅結合生成複合物。
②folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產生深藍色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,藍色深度與蛋白的量成正比。
5.考馬斯亮藍法：
考馬斯亮蘭g-250染料,在酸性溶液中與蛋白質結合,使染料的最大吸收峰的位置(λmax),由465nm變為595nm,溶液的顏色也由棕黑色變為蘭色。經研究認為,染料主要是與蛋白質中的鹼性氨基酸(特別是精氨酸)和芳香族氨基酸殘基相結合。在595nm下測定的吸光度值a595,與蛋白質濃度成正比。
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檢查過程
(1) 標準法制定標準曲線 取14支試管，分兩組按下表a平行操作。 繪製標準曲線：以a595nm為縱座標，標準蛋白含量為橫座標，在座標紙上繪製標準曲線。
(2) 微量法制定標準曲線 取12支試管，分兩組按下表b平行操作。 繪製標準曲線：以a595nm為縱座標，標準蛋白含量為橫座標，在座標紙上繪製標準曲線。
(3) 未知樣品蛋白質濃度測定 測定方法同上，取合適的未知樣品體積，使其測定值在標準曲線的直線範圍內。根據所測定的a595nm值，在標準曲線上查出其相當於標準蛋白的量，從而計算出未知樣品的蛋白質濃度(mg/ml)。
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